低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開(kāi)傘、未裂破的子實(shí)體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)熏蒸消毒12 ～ 24 小時(shí)，再按無(wú)菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過(guò)菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開(kāi)傘或未開(kāi)裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕（即孢子印）。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內(nèi)先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無(wú)菌室或無(wú)菌箱內(nèi)。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實(shí)體，插在收集器內(nèi)的三角架頂上（若無(wú)孢子收集器，也可用培養(yǎng)皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)24 小時(shí)，培養(yǎng)皿中便可見(jiàn)到白色粉狀物，此即為孢子。此時(shí)，可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi)，取出培養(yǎng)皿，蓋好，并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10 ～ 20 毫升的無(wú)菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無(wú)菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養(yǎng)基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養(yǎng)5 ～ 7 天，培養(yǎng)基上便可長(zhǎng)出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時(shí)，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)白色菌絲長(zhǎng)滿試管時(shí)，便得純菌種。

生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)安全性分析

雖然目前生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)大多采用植物根際促生菌， 但近年來(lái)很多研究發(fā)現(xiàn)，芽孢菌屬和類芽孢菌個(gè)別菌株能產(chǎn)生菌素。 即便在安全分級(jí)目錄中列為一級(jí)免做理學(xué)試驗(yàn)的， 開(kāi)展生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)， 從源頭上把好安全關(guān)是產(chǎn)品質(zhì)量安全的首要保障。通過(guò)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 用于生物有機(jī)肥產(chǎn)品的部分生產(chǎn)分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進(jìn)行安全風(fēng)險(xiǎn)的初步識(shí)別 。 以常見(jiàn)生產(chǎn)枯草芽孢菌為例， 實(shí)際上是一個(gè)表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個(gè)緣種。生產(chǎn)企業(yè)送檢的枯草芽孢菌生物有機(jī)肥產(chǎn)品， 經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)很多產(chǎn)品實(shí)際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強(qiáng)的溶血作用。通過(guò)對(duì)生產(chǎn)企業(yè)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 部分生產(chǎn)企業(yè)選擇分離于動(dòng)物腸道的解淀粉芽孢菌作為產(chǎn)品生產(chǎn)用菌株， 該類生產(chǎn)發(fā)酵周期短、 活菌數(shù)量高、 生產(chǎn)成本低， 但產(chǎn)品的應(yīng)用功效不佳， 溶血風(fēng)險(xiǎn)大 ， 建議慎用。而植物來(lái)源的解淀粉芽孢菌溶血風(fēng)險(xiǎn)小， 產(chǎn)品應(yīng)用效果好， 推薦使用。

微生物菌種有什么功效呢？

微生物肥料的功效是一種綜合性作用，一般不直接為農(nóng)作物提供營(yíng)養(yǎng)元素，主要起間接營(yíng)養(yǎng)的作用，歸納起來(lái)主要有如下幾方面。

改良土壤結(jié)構(gòu)

微生物還能分泌產(chǎn)生大量的胞外多糖類物質(zhì)，如莢膜多糖、肽聚糖等。研究表明，這些有益微生物產(chǎn)生的糖類物質(zhì)，占土壤有機(jī)質(zhì)的0.1%，它們能與植物根系分泌物、土壤膠體等共同作用,形成土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)。此外，它們還參與腐殖質(zhì)形成，改善土壤理化性質(zhì)。

改善作物品質(zhì)

許多微生物肥料能改善作物品質(zhì)。根瘤菌固定的氮素能輸往籽粒，使得豆科作物籽粒蛋白質(zhì)含量提高。此外，一些蔬菜施用某些微生物肥料之后，能增加其中的維生素含量，降低葉菜類作物中的含量，提高果菜類作物中的糖分含量等。

低溫生物菌種的應(yīng)用前景及發(fā)展趨勢(shì)

微生物在農(nóng)業(yè)上的作用已逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。國(guó)際上已有70多個(gè)國(guó)家生產(chǎn)、應(yīng)用和推廣微生物肥料。我國(guó)也有250家企業(yè)年產(chǎn)約數(shù)十萬(wàn)噸微生物肥料應(yīng)用于生產(chǎn)。這雖與同期化肥產(chǎn)量和用量不能相比，但確已開(kāi)始在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮作用，取得了一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效應(yīng)，隨著相關(guān)研究的深入和市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大，微生物肥料生產(chǎn)已呈現(xiàn)出規(guī)模化工業(yè)生產(chǎn)模式。