低溫生物菌種的保存方法

低溫保存法

①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；

②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。

生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)使用現(xiàn)狀

細(xì)菌類生產(chǎn)用除常見(jiàn)的芽孢外， 還出現(xiàn)了高地芽孢菌、 類干酪乳菌、 屎腸球菌、 鹽居固氮菌等新， 其中， 高地芽孢菌和鹽居固氮菌普遍存在于土壤環(huán)境中， 未見(jiàn)致病性報(bào)道， 屬風(fēng)險(xiǎn)一級(jí)； 類干酪乳菌又名為副干酪乳菌， 雖為風(fēng)險(xiǎn)一級(jí) ， 但有從動(dòng)物受傷部位分離到該菌的報(bào)道；屎腸球菌屬于乳酸菌類，屬風(fēng)險(xiǎn)二級(jí)， 建議謹(jǐn)慎使用。伯克霍爾德氏菌是一些具有生物防治、 促進(jìn)植物生長(zhǎng)和生物修復(fù)等功能的細(xì)菌， 但同時(shí)也是可以引起鼻疽、 類鼻疽病的致病菌， 因此真菌伯克霍爾德氏菌屬于風(fēng)險(xiǎn)三級(jí)， 需做致病性試驗(yàn)， 建議慎用或不用。真菌類生產(chǎn)用菌株主要為絲狀真菌和酵母菌。哈茨木霉、 米曲霉、 淡紫紫孢菌、 長(zhǎng)枝木霉、 綠色木霉、 棘孢木霉、 黑曲霉、 粉紅螺旋聚孢霉、 金龜子綠僵菌等屬于生物安全風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)二級(jí)， 需按照NY/T 1109－2017 《微生物肥料生物安全通用技術(shù)準(zhǔn)則》 進(jìn)行毒理學(xué)測(cè)試。酵母菌主要以釀酒酵母為主， 還有少量東方伊薩酵母、杰丁塞伯林德納氏酵母 （原產(chǎn)朊假絲酵母、 杰丁畢赤酵母）、 膜醭畢赤酵母、 解脂耶羅威亞酵母等， 屬于生物安全風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)一級(jí)， 可免做毒理學(xué)試驗(yàn)。

低溫生物菌種的應(yīng)用前景及發(fā)展趨勢(shì)

微生物在農(nóng)業(yè)上的作用已逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。國(guó)際上已有70多個(gè)國(guó)家生產(chǎn)、應(yīng)用和推廣微生物肥料。我國(guó)也有250家企業(yè)年產(chǎn)約數(shù)十萬(wàn)噸微生物肥料應(yīng)用于生產(chǎn)。這雖與同期化肥產(chǎn)量和用量不能相比，但確已開(kāi)始在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮作用，取得了一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效應(yīng)，隨著相關(guān)研究的深入和市場(chǎng)需求的不斷擴(kuò)大，微生物肥料生產(chǎn)已呈現(xiàn)出規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)模式。

什么是低溫生物菌種？

低溫生物菌種又稱生物肥料、接種劑或菌肥(bacterial manure)等，是指以微生物的生命活動(dòng)為核心，使農(nóng)作物獲得特定的肥料效應(yīng)的一類肥料制品。微生物肥料和微肥有本質(zhì)的區(qū)別：前者是活的生命，而后者是礦質(zhì)元素。微生物資源豐富，種類和功能繁多，可以開(kāi)發(fā)成不同功能、不同用途的肥料。而且微生物菌株可以經(jīng)過(guò)人工選育并不斷純化、復(fù)壯以提高其活力，特別是隨著生物技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，通過(guò)基因工程方法獲得所需的菌株已成為可能。巨大芽孢菌、膠質(zhì)芽孢菌、固氮芽孢菌、球形芽孢菌、側(cè)孢短芽孢菌等被廣泛用于生產(chǎn)生物肥料。