低溫生物菌種——菌種分離方法

組織分離法

先將所需的藥用真菌采集回來，選取新鮮、個體大、壯實、中齡及無病蟲害的子實體（或菌核、菌索），作為分離用的材料。若為子實體，取其菌蓋或菌柄組織；若為菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若為菌索，取其部分根狀菌索（如蜜環(huán)菌）。再用75 %酒精進行表面消毒2 分鐘，用無菌水（或冷開水）沖洗數(shù)次，洗凈殘留的藥液后切成小塊。，然后，放入PDA 培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)皿上，置24 ～26℃溫度下，培養(yǎng)5 ～ 7 天。在分離的真菌組織周圍見長有白色菌絲時，應(yīng)及時將菌絲移至斜面試管培養(yǎng)基上，再置溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)7～10 天，即得純菌種。所得的純菌種還可繼續(xù)擴大培養(yǎng)或保藏。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

側(cè)孢芽孢菌

在延遲期， 短芽孢菌為革蘭氏染色陰性，菌體呈細長的桿狀；在對數(shù)生長期，為革蘭氏染色陽性，菌體成短而粗的桿狀；在靜止期，革蘭氏染色又轉(zhuǎn)為陰性，菌體成細長的桿狀，偶爾也能觀察到橢圓形的芽孢。圖1是50號菌用1%H2SO4(pH6.8)負染后的電鏡照片：菌體桿狀、周生鞭毛、大小約0.88μm×2.2μm。

作為非脊椎動物的病原菌，有關(guān)研究人員曾報道了這種細菌的殺線蟲能力，由于所報道的這些側(cè)孢短芽孢菌菌株都不產(chǎn)生伴孢晶體，所以這些菌株的殺線蟲毒力因子并非來自于具有特征性的伴孢晶體。然而，Smirnova TA，et al.分離到了2株能形成大的伴孢晶體的側(cè)孢短芽孢菌菌株，這兩株菌顯示出很強的殺昆蟲能力，研究證實，這種能力與菌體在形成芽孢過程中的伴孢晶體相關(guān)。有趣的是，Singer的實驗表明，一株側(cè)孢短芽孢菌的殺線活性源于一個熱穩(wěn)定蛋白的毒性。所有這些研究表明，不同側(cè)孢短芽孢菌菌株擁有不同的線蟲致病因子。牛秋紅研究小組分離到的側(cè)孢短芽孢菌G4菌株具有顯著的殺線蟲功能，但其并不產(chǎn)生伴孢晶體。從該菌株的發(fā)酵液里提取的粗蛋白酶液在12h內(nèi)能殺掉所有測試線蟲并在24h內(nèi)完全降解。從側(cè)孢短芽孢菌G4菌株中純化出的絲氨酸胞外蛋白酶可水解多種底物，包括膠原和線蟲體壁，具有很強的殺線蟲能力，組織病理電鏡實驗證實這種蛋白酶嚴重破壞了線蟲體壁。而且，蛋白酶將線蟲體壁分解成為一些氨基酸或小肽，這些營養(yǎng)物使病原細菌更好的生長繁殖。該蛋白酶基因異源表達的菌株表現(xiàn)出了明顯的殺線蟲活性，重組蛋白酶在體外對線蟲體壁降解，而蛋白酶缺失菌株喪失了大部分的殺線活性，死的線蟲在生測中保持了完整的體壁，表明蛋白酶在線蟲侵染中起主要作用。

生物菌種的優(yōu)點

1、根際環(huán)境保護屏障：菌群中的地衣芽孢菌等有益微生物施入土壤后，迅速繁殖成為優(yōu)勢菌群類，控制根際營養(yǎng)和資源，使重茬、根腐、立枯、流膠、灰霉等病原菌喪失生存空間和條件。使植物根系細胞的細胞壁增厚，纖維化、木質(zhì)化，并生成角質(zhì)雙硅層，形成阻止病原菌侵襲的堅固屏障。

2、增強抗逆性：菌群中的地衣芽孢菌、巨大芽孢菌、側(cè)孢芽孢菌等有益微生物可增強土壤緩沖能力，保水保濕，增強作物抗旱、抗寒、抗?jié)衬芰?同時側(cè)孢芽孢菌還可強化葉片保護膜，抵抗病原菌侵染，抗病，抗蟲。

生物菌種如何才能發(fā)揮出好的效果？

加強環(huán)境調(diào)控 保持菌種活性

有機肥施入土壤后，必須有微生物發(fā)酵腐熟，才能起到改良土壤，提高土壤透氣性的作用。

當(dāng)前，很多菜農(nóng)高溫悶棚前也使用生物菌劑，但因為使用不當(dāng)，常常影響悶棚效果，甚至根本沒有完成糞肥腐熟，蔬菜定植后又出現(xiàn)燒根問題，這是怎么回事呢？

這就要從生物菌的特性說起。要想生物菌劑發(fā)揮應(yīng)有的作用，首先要確保生物菌存活，并快速增殖達到一定數(shù)量，才能充分發(fā)揮其作用。因此，菜農(nóng)一定要深入了解生物菌特性，盡量創(chuàng)造適宜生物菌存活的條件。