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磁珠是一類特殊的納微米材料,它們的尺寸通常在零點(diǎn)幾微米到幾微米之間,僅為一根頭發(fā)絲直徑的十幾分之一到幾十分之一,肉眼是無法觀測到單個(gè)磁珠的。
其次,它們具有超順磁性,在磁場中可以向一側(cè)迅速移動(dòng),聚集在一起,而去除磁場后又能夠迅速恢復(fù)到分散狀態(tài)。
,用于核酸提取的磁珠表面具有特定的性質(zhì),在某些條件下能夠?qū)⒉《竞怂嵛皆诒砻?,在另一些條件下又能將病毒核酸從表面釋放下來,用于后續(xù)的檢測步驟。
這就涉及到比較深入的生物化學(xué)知識。核酸作為一種生物大分子,之所以能夠在水溶液中穩(wěn)定分散不沉淀,是由于三種非共價(jià)作用力的存在:(1)靜電相互作用(2)范德華力(3)氫鍵。
核酸分子具有多個(gè)磷酸基團(tuán),呈現(xiàn)高度負(fù)電性,分子間互相排斥從而避免發(fā)生團(tuán)聚。此外,核酸分子在水溶液中通過氫鍵與范德華力結(jié)合了大量的水分子在其周圍,形成一個(gè)水化層,也阻止了分子間的聚集。因此,要使得核酸分子結(jié)合到磁珠表面,就必須削弱上述作用力,屏蔽溶液中的靜電斥力,同時(shí)破壞核酸分子表面的水化層,使其能夠與磁珠表面相接觸,進(jìn)而產(chǎn)生吸附。
理想微球的微觀形態(tài)應(yīng)為圓整球型或橢圓形實(shí)體,形態(tài)飽滿,顆粒的大小應(yīng)盡可能均勻,微球之間無粘連。通常粒徑在1~250μm的稱微球,而粒徑在0.1~1μm的稱亞微球,粒徑在10~100nm的稱納米球。微觀形態(tài)的觀察可使用掃描電鏡(SEM)、透射電鏡(TEM),以及原子力學(xué)顯微鏡(AFM)。SEM是目前觀察微球形態(tài)使用的方法,被用于表面及切面形態(tài)的觀察。TEM分辨率高,適用于亞微球、納米球粒徑測定。AFM優(yōu)點(diǎn)之一是分辨率高,與SEM相比,不需要對樣品進(jìn)行金屬噴鍍,避免了噴鍍后對樣品的表面形態(tài)造成的破壞,并且AFM允許在液態(tài)環(huán)境下觀測樣品,而SEM則不行。但是AFM缺點(diǎn)是觀察范圍窄,得到數(shù)據(jù)不具有統(tǒng)計(jì)性,適合單個(gè)粒子表面形態(tài)的觀察。
依據(jù)和PLGA的溶解性質(zhì),PLGA微球常用的含量測定方法有 :(1)先用溶解PLGA和,再用不溶于PLGA溶劑沉淀PLGA,經(jīng)過離心或過濾后,取上清進(jìn)液相測定含量。(2)先用溶解PLGA和,再加入醋酸鹽緩沖液等溶劑提取多肽后進(jìn)樣分析。(3)溶劑溶解PLGA及后,直接進(jìn)樣測定。方法(1)和(2)需要在測定之前將高聚物與分離,而且分離過程使用的試劑容易導(dǎo)致?lián)p失。方法(3)的優(yōu)勢在于無需將高聚物與分離,但是應(yīng)用較少,需要使用質(zhì)譜等特殊儀器。