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三(羥)Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會(huì)被去質(zhì)子化,從而提高其溶解性。人們常常在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。如果將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),而換成硼酸則獲得“TBE緩沖液這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)中。
在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過(guò)程中要考慮使用環(huán)境。且來(lái)看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。因?yàn)門ris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。需要注意的是THAM緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,而且易吸收CO2所以需要密封。THAM主要就是用于生物緩沖劑的,與用于的緩血酸胺有差異,需要加以區(qū)別。
常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見(jiàn)的緩沖體系有:
1、弱酸和它的鹽(如HAc---NaAc)
2、弱堿和它的鹽(NH3·H2O---NH4Cl)
3、多元弱酸的酸式鹽及其對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽(如NaH2PO4---Na2HPO4)的水溶液組成。
而生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris(三羥)等系統(tǒng),生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。