廣州碩譜生物科技有限公司NH2固相萃取柱選擇

溶劑環(huán)境的pH怎么影響化合物在小柱上的保留，為什么我們要關(guān)注化合物的pKa值，在C18小柱中需要考慮這些因素嗎？

我們來(lái)說(shuō)一下，Ka指的是酸度系數(shù)，又名酸離解常數(shù)，可以理解為酸離解H離子的能力，而pKa=-lgKa，對(duì)于酸，在環(huán)境pH下存在如下平衡：左邊的A-/HA，實(shí)際是指溶劑環(huán)境下，離子態(tài)和分子態(tài)的比例，右邊反映了左側(cè)兩者的轉(zhuǎn)化關(guān)系，取決于（pH-pKa)的數(shù)值大小。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)物。對(duì)于離子交換小柱，保持目標(biāo)物的離子化而非分子態(tài)，是一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)，這對(duì)于離子交換作用機(jī)理的交換柱，將直接關(guān)系到其實(shí)驗(yàn)成敗。而對(duì)于硅膠鍵合C18小柱的萃取，由于硅膠（—SiOH）不能完全“封端”，在pH大于4.0的情況下，硅膠都會(huì)帶上負(fù)電荷，因而會(huì)使得能電離的化合物與硅膠作用，增強(qiáng)了這種附帶的次級(jí)作用理（主作用力為非極性相互作用力），而使得此類物質(zhì)在硅膠-C18上的保留增強(qiáng)，若只考慮C18的非極性作用力，必然會(huì)導(dǎo)致回收結(jié)果的不盡人意。

固相萃?。⊿olid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱SPE）,也稱固相提取，是一項(xiàng)結(jié)合了選擇性保留、選擇性洗脫等過(guò)程的分離技術(shù)。通常因?yàn)榉聪噍腿∮糜诨衔锏念A(yù)處理，正如反相萃取在色譜中是一種常見(jiàn)的分離方法，反相萃取中的淋洗液通常是一種水相或含水的緩沖溶液，除去水分，從而便于后續(xù)的干燥、濃縮步驟。 SPE也是一個(gè)柱色譜分離過(guò)程，分離機(jī)理、固定相和溶劑的選擇等方面與高1效液相色譜（HPLC）有許多相似之處。

植物油中9種抗1氧化劑檢測(cè)——SPE法

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

分別稱取沒(méi)食子酸丙酯（PG），叔丁基對(duì)苯1二酚（TBHQ），去甲二氫愈木創(chuàng)酸（NDGA），叔丁基對(duì)羧基茴香醚（BHA），2,6-二叔丁基-4-羧甲1基苯1酚（Ionox-100），沒(méi)食子酸辛酯（OG），2,6-二叔丁基對(duì)甲1基苯1酚（BHT），沒(méi)食子酸十二酯（DG）10mg 定容到 10mL，得 1000μg/mL的單標(biāo)

稱取 2,4,5-三羧基苯丁1酮（THBP）1mg，定容到 10mL，得單標(biāo) 100μg/mL。

提取步驟

精密稱取 1g 樣品于 50mL 離心管中，加入 10mL 乙1腈，渦旋 2min，超聲 10min，3000r / min 離心 5min，收集上清液于離心管中，再重復(fù)使用 10mL 乙1腈溶液提取 1 次，合并 2 次上清液，待凈化。

水產(chǎn)品中苯并(a)芘的測(cè)定反相高1效液相色譜法

方法特點(diǎn)

● 方法簡(jiǎn)單快速，不需要進(jìn)行復(fù)雜的活度調(diào)節(jié)和活性測(cè)試，整個(gè)操作時(shí)間不超過(guò)1h?！?耗費(fèi)溶劑少,僅為GB 5009.27—2011的1/3?！?去油效果佳，能有效去除油酯等干擾?！?有較高的回收率和穩(wěn)定性。● 適用于熏烤水產(chǎn)品等肉、魚(yú)及其制品的檢測(cè)。

樣品前處理在儀器分析過(guò)程中是一個(gè)既耗時(shí)又極易引進(jìn)誤差的步驟，樣品處理的好壞直接影響色譜分析的結(jié)果，固相萃取小柱又是一種用途廣泛而且越來(lái)越受歡迎的樣品前處理技術(shù)，因此，為了提高分析測(cè)定效率，使用好固相萃取小柱是非常有必要

正相機(jī)制：

在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)之間會(huì)產(chǎn)生極性力。通常使用極性力的吸附劑在色譜中被稱為正相色譜吸附劑。極性力強(qiáng)度大于非極性力，但小于離子力強(qiáng)度；常用的極性基團(tuán)有羥基、胺基、巰基等。

由于非極性溶劑不能與極性固定相材料形成具有氫鍵的官能團(tuán)，因此非極性基質(zhì)環(huán)境對(duì)吸附劑和目標(biāo)化合物之間的極性作用力是有利的。C18填料是十八烷1基硅1烷鍵合硅膠，pH值超出酸性范圍時(shí)，鍵合相十八烷1基易發(fā)生水解而流失。結(jié)果表明，在極性作用下，樣品的固相萃取過(guò)程中，基質(zhì)主要是非極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)化合物多含有極性較大的官能團(tuán)。

對(duì)SPE柱進(jìn)行合理的處理

在 SPE柱中，吸附劑可能存在少量干擾物，有效活化可避免干擾物進(jìn)入洗脫液中，活化溶液應(yīng)選擇整個(gè)洗脫過(guò)程中洗脫強(qiáng)度zui高的溶劑體系；在反相模式下，從樣品溶液到洗脫液的過(guò)程主要涉及到0%-100%甲1醇水溶液，因此應(yīng)選擇純甲1醇活化溶液，而在目標(biāo)化合物需要用甲1醇-甲ji叔丁基醚混合液洗脫時(shí)，則應(yīng)選擇純甲ji叔丁基醚溶液；在正相模式下，從樣品溶液到洗脫液的過(guò)程主要涉及到0%-100%正己烷-甲ji叔丁基醚溶液的過(guò)程，因此活化溶液應(yīng)選擇純甲ji叔丁基醚溶液。廣州碩譜生物科技有限公司NH2固相萃取柱選擇為什么反相填料C18使用時(shí)建議溶液的PH范圍是2-8。

色譜柱技術(shù)的差距在哪里？

答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。因?yàn)镃8的碳鏈較短，不能覆蓋硅膠的表面，其極性作用力比C18要強(qiáng)。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。

國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料，一般買國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。結(jié)果表明，在極性作用下，樣品的固相萃取過(guò)程中，基質(zhì)主要是非極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)化合物多含有極性較大的官能團(tuán)。另外因?yàn)檠b柱歷史短，經(jīng)驗(yàn)積累少，裝柱工藝也沒(méi)有完全達(dá)到國(guó)外水平。另外，對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠，國(guó)產(chǎn)的還不過(guò)關(guān)，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比，差距很大。