ELISA 是一種結(jié)合抗原、抗ti特異性反應(yīng)和酶對(duì)底物高xiao催化作用的高敏感性免yi學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗ti既保留其免yi學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標(biāo)本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應(yīng)，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗ti，通過反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶含量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

二、大腸菌群檢驗(yàn)方法:

由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即:需氧及兼性厭氧、在37°C能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞。因此大腸菌群的檢測一般都是按照它的定義進(jìn)行。 目前國內(nèi)采用的進(jìn)出口食品大腸菌群檢測方法主要有國家標(biāo)準(zhǔn)和原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)方法在檢測程序上略有不同。

(一)國家標(biāo)準(zhǔn):國家標(biāo)準(zhǔn)采用三步法，即:乳糖發(fā)酵試驗(yàn)、分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。乳糖發(fā)酵試驗(yàn):樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36士1C培養(yǎng)48土2h，觀察是否產(chǎn)氣。分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，36士1°C培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。證實(shí)試驗(yàn):挑取平板上的菌落，進(jìn)行革蘭氏染色觀察。同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管36士1°C培養(yǎng)24土2h,觀察產(chǎn)氣情況。

報(bào)告:

根據(jù)證實(shí)為大腸陽性的管數(shù)，查MPN表，報(bào)告每100ml ( g)大腸菌群的MPN值。具體操作參見GB4789. 3-94 《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群測定》

(二)原國家商檢局制訂的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，等效采用美國FDA的標(biāo)準(zhǔn)方法，用于對(duì)出口食品中的大腸進(jìn)行檢測。本方法采用兩步法：推測試驗(yàn):樣品稀釋后，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種三管LST肉湯。36士1C培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。證實(shí)試驗(yàn):將產(chǎn)氣管培養(yǎng)物接種煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中，36士1°C培養(yǎng)48士2h，觀察是否產(chǎn)氣。以BGLB產(chǎn)氣為陽性。查MPN表，報(bào)告每ml(g)樣品中大腸菌群的MPN值。具體操作參見SN0169-92《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗(yàn)方法》

線粒體測序

線粒體是真核生物的重要細(xì)胞器，是生物體的能量工廠，參與能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等許多生命活動(dòng)，對(duì)生物的生理活動(dòng)起著至關(guān)重要的作用。大部分線粒體基因由于其母系遺傳特性以及進(jìn)化速率較快等特點(diǎn)，被廣泛地用于種群遺傳學(xué)、進(jìn)化生物學(xué)、譜系地理學(xué)和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)、疾病診斷等學(xué)科領(lǐng)域。線粒體全基因組在生物進(jìn)化的研究中具有獨(dú)特的優(yōu)勢。由于線粒體有著與真核生物長期共生的進(jìn)化歷史，因此其基因組包含了反映物種進(jìn)化的關(guān)鍵信息，同時(shí)，相對(duì)于核基因組，線粒體基因組小，容易對(duì)大量物種進(jìn)行橫向的比較分析，有利于生物進(jìn)化的研究，因而受到進(jìn)化生物學(xué)家的鐘愛。線粒體的組成可以從兩個(gè)層面上反映物種及群體的遺傳和進(jìn)化，即核酸序列組成和基因組的結(jié)構(gòu)特征，兩者的特征具有不同的進(jìn)化機(jī)制和進(jìn)化速度，在進(jìn)化生物學(xué)研究中可以很好的互補(bǔ)。