等溫核酸試劑盒

據(jù)介紹，RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，還可以對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過(guò)試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長(zhǎng)度在500bp以內(nèi)。不過(guò)，經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長(zhǎng)的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。

核酸試劑盒是如何工作的？

病毒的基因序列被設(shè)定為檢測(cè)靶點(diǎn)，通過(guò)對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因PCR反應(yīng)模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應(yīng)前，應(yīng)將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄為DNA，使靶點(diǎn)的DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來(lái)的DNA序列都可以于預(yù)先加入的熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來(lái)的靶點(diǎn)基因越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)（就好比演唱會(huì)如果只有一個(gè)粉絲搖熒光棒很不顯眼，如果大家一起搖那就嗨了）。如果樣本中沒(méi)有該病毒，自然也就檢測(cè)不到熒光信號(hào)的增強(qiáng)了。

“一般來(lái)說(shuō)，核酸檢測(cè)是目前準(zhǔn)確的診斷方法?！庇腥烁嬖V記者，核酸檢測(cè)試劑盒出現(xiàn)假陰性，即沒(méi)有發(fā)現(xiàn)隱藏的病毒，可能與兩個(gè)方面有關(guān)。一是樣品沒(méi)有采集到。這一點(diǎn)很容易理解。例如，咽拭子采樣時(shí)人比較難受，深度不夠可能會(huì)采集不到含有病毒的樣本。但這樣的情況應(yīng)該很少發(fā)生。

另一個(gè)假陰性的原因是核酸檢測(cè)試劑盒的探針和引物質(zhì)量有波動(dòng)，特別是定量的不造成檢測(cè)的不準(zhǔn)確。換句話說(shuō)，由于這一次各家核酸檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商都是臨時(shí)啟動(dòng)，有些準(zhǔn)備不足，或是執(zhí)行規(guī)定步驟不到位，導(dǎo)致在生產(chǎn)過(guò)程中不進(jìn)行定位，或是酶活性不足，或是酶中含有抑制酶鏈反應(yīng)的重金屬離子等，都可能造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陰性。

數(shù)字PCR法和熒光PCR法的關(guān)鍵區(qū)別在于檢測(cè)結(jié)果的定量和相對(duì)定量差異。據(jù)了解，現(xiàn)階段數(shù)字PCR試劑和機(jī)器相價(jià)格加高（一臺(tái)儀器近百萬(wàn)元），在SARS-CoV-2快速檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)并不大。

不過(guò)，由于具備自動(dòng)化程度更好、耗時(shí)更短等技術(shù)優(yōu)勢(shì)，國(guó)內(nèi)多家掌握了數(shù)字PCR技術(shù)的核酸試劑研發(fā)企業(yè)正在嘗試開(kāi)發(fā)適用于SARS-CoV-2檢測(cè)的相關(guān)試劑盒。