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在眾多的生物實驗室,分子生物學(xué)檢測方法如PCR因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢已經(jīng)被廣泛應(yīng)用,不過正是由于它靈敏度極高,微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性,所以對環(huán)境污染的控制也極為嚴(yán)格。面對眾多的污染源,比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、質(zhì)粒污染、PCR擴增產(chǎn)物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染,氣溶膠是由固體或液體小質(zhì)點分散并懸浮在氣體介質(zhì)中形成的膠體分散體系,在空氣與液體面摩擦?xí)r,比如在操作時比較劇烈地?fù)u動反應(yīng)管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復(fù)吸樣都可形成氣溶膠而污染。據(jù)計算一個氣溶膠顆??珊?8000拷貝,因而由其造成的污染是一個非常重要而被忽視的污染源。
實驗室耗材作為實驗猿管理實驗室必備的用具,實驗室管理員統(tǒng)一管理實驗室耗材、試劑,應(yīng)詳細(xì)記錄實驗室所領(lǐng)取的各項耗材、試劑。各負(fù)責(zé)人按照負(fù)責(zé)的實驗種類領(lǐng)取相應(yīng)的耗材、試劑。不同實驗室耗材管理的方法各有不同,聽聽實驗猿怎么說!
雖然這些污染對PCR實驗結(jié)果的影響已經(jīng)受到了廣泛重視,多數(shù)實驗室對污染控制都采取了各種辦法,比如定期大掃除清理、劃分操作區(qū)域、試劑分裝、操作謹(jǐn)慎、重復(fù)實驗、多角度驗證結(jié)果。但是微量的核酸片段就能被擴增,所以對污染物的控制不僅僅是做到這些就能夠杜絕和避免的,關(guān)鍵是需要從源頭控制。目前多數(shù)生物試驗室,分子實驗每天都在大規(guī)模進行,污染源已經(jīng)無處不在,特異性的,非特異性的,同源的,非同源的,廣泛分布在樣本容器、實驗室臺面,試劑溶液中、儀器表面內(nèi)管附著等等,你以為普通的清理就能解決這些污染源嗎?必須是不行的,實驗室大拿們都為了清除這些污染源研究出好多種方法,整理跟大家共享。
當(dāng)然每個省份在PCR實驗室技術(shù)評審時所要求的重點都有所差異,有些省份比較重視質(zhì)量控制,有些省份比較重視結(jié)果的發(fā)放及抱怨處理,有些則熱衷于檢查儀器及試劑的資質(zhì)。分析我國大PCR實驗室的檢測項目不難發(fā)現(xiàn),近80%的實驗室采用熒光PCR試劑盒進行臨床檢測,即這部分實驗室不存在開放性核酸鑒定環(huán)節(jié),試劑工作液的配制多在核酸制備完成后進行,依存“試劑配置與PCR擴增之間的時間越短越好”的原則,多數(shù)實驗室的試劑配制均在核酸制備室完成,也就是說,試劑配制室的存在基本被忽視,了解了羅氏COBAS的操作方式,這種做法便顯得無可厚非!核酸制備完成并加入PCR反應(yīng)液后,移管到擴增室,由于采用封閉核酸鑒定的方法,這樣擴增室的設(shè)置也同樣顯得多余!