色譜柱是HPLC系統(tǒng)非常關鍵的一部分，隨著色譜技術的發(fā)展，它也不斷地更新?lián)Q代，長度變得越來越短，填料顆粒也越來越細?，F(xiàn)在常用的色譜柱長度在30～250 mm，顆粒直徑在1.6～5μm。顆粒類型主要有全多孔和表面多孔，全多孔填料具有更大的柱容量、更多鍵合相選擇的優(yōu)點，表面多孔具有反壓低、峰形好的優(yōu)點。的基質(zhì)是硅膠。以前填料純化技術不是很成熟，十八烷基鍵合到硅膠表面不是很完全，硅膠上總是少量的硅羥基在外面。制備型加壓液相色譜，按照色譜柱和樣品量的大小，分為：（1）低壓液相色譜。這樣就造成樣品在進行色譜分離的時候，會吸附或者鍵合在這部分硅羥基上，導致色譜峰拖尾。使用三乙胺作為封尾劑，與硅羥基吸附，可以使峰型改善，這個三乙胺曾經(jīng)一度成為分析界的寶貝和。現(xiàn)在，制造填料的技術日趨成熟，人們已經(jīng)掌握了把這部分剩余未鍵合硅膠也進行鍵合鈍化的技術，這個技術就叫作封尾。

一般來說，涂有極性固定相和較厚涂層的色譜柱老化時間長，而弱極性固定相和較薄涂層的色譜柱所需時間較短。而PLOT色譜柱的老化方法有各不相同。 PLOT柱的老化步驟:HLZ Pora 系列 250℃， 8小時以上Molesieve分子篩 300℃ 12小時Alumina氧化鋁 200℃ 8小時以上由于水在氧化鋁和分子篩PLOT柱中的不可逆吸附，使得這兩種色譜柱容易發(fā)生保留行為漂移。當柱子分離過含有高水分樣品后，需要將色譜柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。設置確認載氣流速對于 毛細管色譜柱，載氣的種類高純度氮氣或氫氣。載氣的純度大于99.995%，而其中的含氧量越少越好。這時先看普通流量能否沖走，如果沖不走，那辦法就是拆柱，把檢測器直接連接到輸送泵的出口，加大幾部流量沖洗，則肯定能沖走氣泡。如果您使用的是 毛細管色譜柱，那么依照載氣的平均線速度（cm/sec）,而不是利用載氣流量（ml/min）來對載氣做出評價。因為柱效的計算采用的是載氣的平均線速度。推薦平均線速度值：氮氣：10-12cm/sec 氫氣：20-25cm/sec載氣雜質(zhì)過濾器在載氣的管線中加入氣體過濾裝置不僅可以延長色譜柱壽命，而且很大程度的降低了背景噪音。建議安裝一個高容量脫氧管和一個載氣凈化器。使用ECD系統(tǒng)時，能在其輔助氣路中也安裝一個脫氧管。

塞桿 現(xiàn)象：液相色譜儀無流動相流出，壓力波動，更換新的墊圈后仍滲漏。原因：一旦出現(xiàn)以上現(xiàn)象，只有更換柱塞桿。更換進要用專用工具，由于此項操作比較復雜困難，故需請專業(yè)維修工程師來解決。也可自行按說明書的指導仔細進行。     

進樣系統(tǒng)     液相色譜儀當測量樣品的面積，峰高數(shù)據(jù)不重復時，則要考慮進樣系統(tǒng)的問題。手動進樣器 首先檢查手動進樣器是否有滲漏，一般是由于污染使轉子磨損或用尖頭的針扎進手動進樣器，劃傷了轉子。因此在定期清洗進樣器，使用緩沖液后，要用水進行充分的沖洗，以防沉積結晶鹽，磨損轉子。如確定轉子已磨損，則要更換轉子。若有進樣器管路部分阻塞，可分段檢查，將阻塞的管路拆下，反裝在泵出口處進行反沖。     ②自動進樣品 A、針密封墊損壞。此時出現(xiàn)滲漏。解決的辦法是將自動進樣器順序設定在維修位置。氣泡進入閥中會緊貼在閥體的一側，使球難以返回到閥座，引起倒流，使壓力和流速變化范圍大，有時甚至為零。取下密封墊，更換一新的后將針復位。B、針污染。取下針，放在內(nèi)進行超聲清洗，或更換新針。C、定量環(huán)污染。取下定量環(huán)反裝在泵的出口，以為流動相用大流速進行反沖。也可更換新的定量環(huán)。

中壓液相色譜（MPLC）柱壓在5-20bar（或75-300psi）之間，廣泛用于實驗室和工業(yè)規(guī)模的生物制品(如動物臟器提取液、濃縮液、體液、植物提取液、生物技術發(fā)酵液等--往往需要經(jīng)過濾膜作初級凈化)的處理，以提取或純化所需的產(chǎn)品。 高壓液相色譜(HPLC)是指柱壓一般大于20bar（或300psi）的“高壓(或)液相色譜”，通常指所用色譜柱的塔板數(shù)大于2000，一般是在2，000～20，000的范圍之間。進樣系統(tǒng)液相色譜儀當測量樣品的面積，峰高數(shù)據(jù)不重復時，則要考慮進樣系統(tǒng)的問題。