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發(fā)布時(shí)間:2021-09-16 20:46  






組成編輯完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或的固相載體(吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制(定量測(cè)定中);(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;(7)酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的終體積而異,在板式ELISA中一般采用3mol/L。



哺乳動(dòng)物細(xì)胞溶質(zhì)中的SOD呈綠色,并且由兩種亞單位構(gòu)成,一種含有銅,另一種含有鋅(Cu/Zn-SOD)。線(xiàn)粒體和細(xì)菌SOD為紅紫色并含有錳(Mn-SOD)。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。為了測(cè)定SOD的活性,研究人員嘗試了許多間接的或者直接的方法,其中,NBT的間接法為常用,因?yàn)樗芊奖恪5?,NBT法有幾個(gè)缺點(diǎn),例如生成的染料水溶性差,而且會(huì)和氧化酶的還原型發(fā)生反應(yīng)。雖然cytochrome C法也常被用來(lái)做SOD檢測(cè),但它和超氧化物反應(yīng)過(guò)于劇烈,不能測(cè)定低水平的SOD。



使用貼壁細(xì)胞時(shí):① 棄盡培養(yǎng)液,向培養(yǎng)皿中加入650 μl的Solution A,室溫靜置1分鐘。注)96孔板等的每個(gè)孔中一次容納不了650 μl 溶液時(shí),請(qǐng)分?jǐn)?shù)次處理細(xì)胞。② 用移液的頭吹落貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,取650 μl的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至Collection Tube中。③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘,然后室溫靜置1分鐘。2. 加入400 μl的Solution B,振蕩混合。3. 加入1 ml的4℃預(yù)冷的Solution C,充分混勻后,12,000 rpm離心2分鐘。4. 棄去上層有機(jī)相,再加入1 ml的4℃預(yù)冷的Solution C,充分混勻后,12,000 rpm離心2分鐘。



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