液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長(zhǎng)，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流出色譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達(dá)到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題，也是分離的首要條件。

其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長(zhǎng)展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分離效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

經(jīng)常有客戶疑惑，柱子是否可以反沖？

什么樣的柱子可以反沖？什么不可以？

反沖后是正著用，還是反著用？

一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。月旭的絕大多數(shù)色譜柱都是可以反沖，并且我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。

　制備液相色譜的特點(diǎn)

      1、制備液相色譜采用了自動(dòng)進(jìn)樣器與全封閉樣品瓶,極大地解放了人力;

　　2、使用高精度HPLC制備色譜泵,重現(xiàn)性良好;

　　3、使用了儀器標(biāo)配ELSD檢測(cè)器,可用于無紫外吸收樣品檢測(cè);

　　4、使用高壓梯度混合,不需要脫氣機(jī),梯度基本無滯后;

　　5、可使用5u或10u的制備色譜柱,分離效能可與分析柱等同;

　　6、制備色譜采用燈-鎢燈組合光源,光譜范圍覆蓋190nm-900nm;

　　7、帶有單色儀自校正功能,波長(zhǎng)準(zhǔn)確性可達(dá)0.2 nm;

　　8、帶有光源自檢功能,管理光源壽命,提醒及時(shí)更換;

　　9、可使用各種光程的外置式流通池,更換極為方便;

　　10、儀器支持FLASH色譜組件與中壓色譜組件,使用成本更低;

　　11、檢測(cè)器同時(shí)檢測(cè)4個(gè)波長(zhǎng)的色譜峰,并可以同圖顯示 并指導(dǎo)收集;

　　12、采用1200線高分辨光柵,在紫外-可見范圍具有良好的分光效能。

半制備液相色譜層析系統(tǒng)如何關(guān)機(jī)

      1、點(diǎn)擊中斷后沖幾分鐘，將流速設(shè)為0，待壓力為0后將吸頭轉(zhuǎn)移到中，并把流速設(shè)為10;

　　2、沖到已經(jīng)沒有東西被沖下為止，一般需要半個(gè)小時(shí)。一般此時(shí)壓力早已穩(wěn)定;

　　3、將流速設(shè)為0，點(diǎn)擊界面上的關(guān)閉(在啟動(dòng)旁邊);

　　4、關(guān)閉窗口，彈出的窗口都點(diǎn)肯定的，如確定是等;

　　5、關(guān)閉儀器和電腦;

　　6、關(guān)閉插板。