核酸試劑盒

TwistAmp? exo 試劑盒為用戶提供了一個(gè)exo試劑盒，加上用于實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)的引物探針及陽(yáng)性模板，該模板可與每次檢測(cè)反應(yīng)配合使用。

TwistGlow? 沙門(mén)氏菌（即用型，可用于實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)）和 TwistFlow? 沙門(mén)氏菌（即用型，可用于終點(diǎn)側(cè)流檢測(cè)）試劑盒均為用戶提供包含靶基因及內(nèi)部質(zhì)控引物探針?lè)磻?yīng)組分、一個(gè)兩步走的細(xì)胞裂解樣本制備方法，以及可與每次試劑盒反應(yīng)配合使用的模板。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非常快，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。RPA擴(kuò)增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴(kuò)增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴(kuò)增結(jié)果可以通過(guò)凝膠電泳進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個(gè)基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實(shí)現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來(lái)說(shuō)，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過(guò)反應(yīng)終點(diǎn)的擴(kuò)增子總量有所減少，適合獲得強(qiáng)熒光信號(hào)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)分析，不適合終點(diǎn)檢測(cè)(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來(lái)，可以一步實(shí)現(xiàn)RNA模板的實(shí)時(shí)擴(kuò)增。

等溫核酸試劑盒

目前疑似病例與確診病例已逾6萬(wàn)例，核酸檢測(cè)需求量與日俱增。另外，湖北省增加“臨床診斷”分類(lèi)，將疑似病例標(biāo)準(zhǔn)放寬，需要更多保質(zhì)保量的核酸檢測(cè)產(chǎn)品投入應(yīng)用。國(guó)家審核批準(zhǔn)的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)產(chǎn)品大多采取的是“實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)”方法，RT-PCR需要核酸提取、擴(kuò)增2個(gè)步驟完成，但目前市面上部分注冊(cè)產(chǎn)品僅有擴(kuò)增產(chǎn)品，沒(méi)有核酸提取產(chǎn)品，缺乏系統(tǒng)的核酸檢測(cè)方案，無(wú)法保證核酸檢測(cè)的系統(tǒng)性、準(zhǔn)確性及可靠性，也間接造成了核酸檢測(cè)遭到社會(huì)公眾質(zhì)疑的尷尬局面。因此，當(dāng)檢測(cè)產(chǎn)品投入后，可能還需匹配不同廠家的核酸提取試劑，對(duì)抗疫工作的開(kāi)展產(chǎn)生了一定影響。