PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則

工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔。工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況，試劑準(zhǔn)備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應(yīng)大一些。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——擴(kuò)增區(qū)

為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。

PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。

由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動紫外燈（254nm波長），在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺上60～90cm內(nèi)照射。

PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA，可看作生物體外的特殊DNA。通過DNA基因追系統(tǒng)，能迅速掌握生物體內(nèi)的病毒含量，其精準(zhǔn)度高達(dá)納米級別。

核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。

PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——標(biāo)本制備區(qū)

為避免樣本間的交叉污染，加入待測核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

PCR實(shí)驗(yàn)室布局

實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動。