備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對(duì)高的價(jià)值的制備柱來(lái)講，延長(zhǎng)柱子壽命是很重要的。一般要注意保護(hù)柱子，一般來(lái)說(shuō)，制備柱子一般需要保護(hù)柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質(zhì)較多而您在上樣前沒(méi)有經(jīng)過(guò)過(guò)濾（0.45微米），一些顆粒性雜質(zhì)會(huì)積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因?yàn)槟褂玫牧鲃?dòng)向中含有緩沖鹽的原因，結(jié)晶或發(fā)生化學(xué)變化而堵塞?？梢园阎記_一沖。

（3）流動(dòng)相是否符合液相色譜的要求？是否過(guò)濾處理？

反相色譜分離純化后，怎樣除去流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑?？梢杂脙龈傻霓k法去除，國(guó)外許多文獻(xiàn)是這樣報(bào)道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實(shí)驗(yàn)前盡量先檢測(cè)一下凍干品中的殘留量，只要不超過(guò)允許范圍，這種辦法是很簡(jiǎn)單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個(gè)小一點(diǎn)兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗(yàn)要求。如果用分子篩，考慮稀釋?zhuān)M量也先過(guò)一個(gè)離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會(huì)形成TFA鹽，這樣通過(guò)上述方法就無(wú)法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來(lái)。或者在里面加入一定量的鹽酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

工業(yè)制備色譜

蛋白質(zhì)的特點(diǎn)使得其分離過(guò)程與傳統(tǒng)化工分離過(guò)程有著極為不同的特點(diǎn):(1)分離對(duì)象是具有特定的生物活性的生物大分子產(chǎn)品，分離過(guò)程設(shè)計(jì)中不恰當(dāng)?shù)奈锢砗突瘜W(xué)環(huán)境等(如溫度、PH值、緩沖液選擇、、攪拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而使之失活;(2)由于發(fā)酵液、細(xì)胞培養(yǎng)液或勻漿液中，我們所需要的目標(biāo)產(chǎn)物往往存在于含有許多性質(zhì)十分相似的雜質(zhì)的稀溶液中，如何從這樣一種復(fù)雜的稀溶液中經(jīng)濟(jì)有效地提取產(chǎn)物是生物分離技術(shù)面臨的重大課題;(3)從衛(wèi)生和安全角度出發(fā)，對(duì)于用基因工程產(chǎn)品，有著極高的純度和同一性要求，對(duì)其中的有害雜質(zhì)去除率要求極高，對(duì)分離設(shè)備材質(zhì)和分離過(guò)程中引入的分離介質(zhì)也有著嚴(yán)格的限制。