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色譜柱一般用硅膠作基質(zhì),只能在pH2-9的范圍使用。柱使用一段時(shí)間后,可能會(huì)有一些吸附作用強(qiáng)的物質(zhì)留在柱頂,尤其是一些有色物質(zhì)更容易在柱頂?shù)奶盍仙峡吹?。在使用一段時(shí)間后,新的柱頂填料會(huì)塌陷,使柱效降低,此時(shí)還可補(bǔ)加填料,使柱效恢復(fù)。如 ODS柱,在每次工作結(jié)束后用強(qiáng)力洗脫劑,如 ODS柱,以沖洗到基線平衡。用鹽緩沖液作流動(dòng)相時(shí),用完后用無鹽流動(dòng)相沖洗。含有鹵族元素的化合物(氟、氯、)可能對(duì)不銹鋼管道造成腐蝕,不適合長時(shí)間接觸。HPLC儀柱式安裝如果不經(jīng)常使用,應(yīng)每4-5天開一次電源,沖洗15分鐘。
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探測(cè)器的維護(hù)1.光源部分探測(cè)器的重要組成部分是光源,光源對(duì)發(fā)射能量有要求,一旦能量衰減到一定程度,就會(huì)出現(xiàn)一系列影響光源使用的問題,如基線噪聲變大、靈敏度下降等。一般 UV燈的使用壽命為2000 h,當(dāng)達(dá)到這一時(shí),我們就特別注意燈的能量狀況,可通過儀器維護(hù)軟件中自帶的“燈能測(cè)試”功能判斷,測(cè)試結(jié)果將分別評(píng)估低、中、高三個(gè)波長段的能量,一旦某一波長段測(cè)試結(jié)果顯示失敗,就表示需要更換燈。2.檢測(cè)池探測(cè)器的另一個(gè)重要組成部分就是檢測(cè)池,也稱為循環(huán)池。一般來說,檢測(cè)池是大家比較關(guān)心的問題之一,因?yàn)闄z測(cè)池的耐壓能力一般都不高,所以一旦被堵住,很容易造成損壞。實(shí)際上,檢測(cè)池一般不太容易堵塞,因?yàn)閹缀跛械念w粒雜質(zhì)都會(huì)被色譜柱截獲,因此堵塞檢測(cè)器的東西基本不是來自樣品,很可能是后來“產(chǎn)生”,例如,含鹽流動(dòng)相殘留在檢測(cè)池中導(dǎo)致鹽析出。六、廢液處理LC廢液中大部分含有,對(duì)人體有一定的危害,對(duì)環(huán)境也會(huì)造成污染,嚴(yán)禁隨意傾倒,應(yīng)及時(shí)處理。當(dāng)前,國內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都是把廢液運(yùn)往廢液處理站進(jìn)行無害化處理。
如果換下來的是灰黑色的,這是常見的情況,這是由于泵頭密封墊磨損造成的,如果出現(xiàn)頻繁更換白頭切替換下來的都是灰黑色的,這是常見的情況,這是因?yàn)楸妙^密封墊的磨損所致,如果出現(xiàn)頻繁更換白頭切替換下來的情況,就該講衛(wèi)生了。3.3流動(dòng)相替代有時(shí)會(huì)在泵的使用中出現(xiàn),這種替代是指將流動(dòng)相從反相溶劑替換為正相溶劑,或反過來替換為溶劑,這個(gè)過程的是與流動(dòng)相的兼容性,常用的正反相色譜溶劑是不互溶的,因此在更換中間,必須用異沖洗系統(tǒng),保證管路中所有的原有溶劑都不能完全溶解。
繼續(xù)往前走,到進(jìn)樣器,進(jìn)樣器分為手動(dòng)和自動(dòng)兩大類,雖然它們的工作方式不同,但要點(diǎn)基本相同:4.1自動(dòng)進(jìn)樣器常見的問題是臟,用術(shù)語稱其為交叉污染,交叉污染產(chǎn)生的原因非常直接,樣品在進(jìn)樣針/外表面殘存,并且在下一個(gè)進(jìn)樣進(jìn)入色譜系統(tǒng)時(shí),要解決交叉污染,也很簡單,就是洗,自動(dòng)進(jìn)樣器都會(huì)有洗針的功能,如果樣品濃度較高,就會(huì)有洗針的功能。如忘了開啟洗針功能,可能會(huì)殘留在針座或流通閥上,此時(shí)要將這兩個(gè)部件清洗,需要按照說明書上的維修步驟將這兩個(gè)部件拆開超聲清洗。4.2在自動(dòng)進(jìn)樣器中還出現(xiàn)了峰面積重新生成的問題。一般這是因?yàn)樽詣?dòng)進(jìn)樣器在吸樣品時(shí)有問題,首先要觀察樣品的液面是否夠高,以保證進(jìn)樣器能被吸進(jìn);如果排除了這個(gè)問題,要看一下自動(dòng)進(jìn)樣器的設(shè)置,對(duì)于一些粘度大的樣品,要降低自動(dòng)進(jìn)樣器的吸收速度,這個(gè)時(shí)候要看一下樣品瓶的吸入量;當(dāng)然,還有一些比較少見的問題:樣品被吸附在樣品瓶上,此時(shí)要考慮更換樣品瓶;還有一種情況,是因?yàn)闃悠菲康钠可w擰緊太緊,所以這個(gè)時(shí)候要考慮把瓶蓋擰松。
有些孩子做的比較好,為了防止其,禁止灰塵進(jìn)入小房間,創(chuàng)造了種種發(fā)明,他們?cè)谖蓓斏香@了幾個(gè)小孔,進(jìn)氣孔用濾頭堵住,既能進(jìn)氣又能防塵,效果很棒。有些使用了安全帽,其效果是一樣的。流化床本身的要求也很嚴(yán)格,超聲波除氣當(dāng)然是必選,微膜過濾也要經(jīng)過這一關(guān),除去有害氣體,濾掉有害顆粒,還要經(jīng)過濾頭的檢驗(yàn)——濾頭孔徑是0.45 um,材料分為玻璃燒英和不銹鋼的,如果這個(gè)東西臟了的話,就會(huì)造成吸液不暢,不過可以進(jìn)行清洗,玻璃材質(zhì)的一般是用稀浸過夜的。
除氣裝置流動(dòng)相經(jīng)過過濾頭檢測(cè)的流動(dòng)相自然要經(jīng)過預(yù)脫氣,這樣可以大大降低脫氣機(jī)的工作負(fù)荷,因?yàn)槊摎鈾C(jī)的脫氣效率是一定的,如果溶解的氣體超過了脫氣機(jī)能處理的大值(特別是在高流速的情況下),氣體就會(huì)去除不干凈,這時(shí)就有可能在混合時(shí),形成氣泡影響儀器壓力波動(dòng)和噪音。流動(dòng)性耐動(dòng),如果長時(shí)間待在脫氣機(jī)中,由于微生物的存在,細(xì)菌藻類很可能繼續(xù)繁殖,脫氣管道中布滿了藻類而堵塞,亦或也會(huì)聚合,因此,長時(shí)間不用的脫氣機(jī)一定將水替換成,防止長藻和聚合。堵漏是一對(duì)歡喜冤家,液相色譜上可以堵住的地方,也都有可能漏出,脫氣機(jī)也不例外,通常漏液有兩種可能,一種是接頭松動(dòng),再擰緊,再擰緊,就比較倒霉了。
HPLC的 HPLC經(jīng)驗(yàn):【1】泵壓跳動(dòng),跳動(dòng)范圍約10 bar。對(duì)策:原來的小白頭有點(diǎn)臟,換了之后還沒有解決;2、將主動(dòng)閥上的閥芯取出后,發(fā)現(xiàn)類似氣泡存在,在超聲5分鐘內(nèi)浸入-水溶液中試著除去氣泡,重新安裝后觀察,仍未解決;更換新閥芯,安裝完畢后,再也沒有跳動(dòng),觀察一段時(shí)間后比較平穩(wěn),順利解決?!?】失敗原因:①plug homing over pressure②注漿和設(shè)流速時(shí),無壓力,無液體流出③檢光閘不能復(fù)位④進(jìn)完大濃度樣品后,進(jìn)空白相應(yīng)位置也出峰。
起因:①在線過濾堵塞②泵頭下訂單向閥堵?、蹤z測(cè)池很臟,也有可能是光路有些堵,再不行可能是燈壽命到了④抹布臟了,需要更換。對(duì)策:①在線濾網(wǎng)卸下,置燒杯,加純化水煮沸5-10分鐘后,超一下一般就可以了,如果還堵的話就拿稀泡,還不行,就換新的,這是個(gè)消耗品②將泵頭下端向閥卸下,兩個(gè)都可能堵死,剛卸下來時(shí)豎在耳邊搖晃就聽不到聲音了。只要簡單地拿起洗耳球?qū)蜗蜷y吹一次(注意方向),吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲檢查,但不可用水煮,一般超至在耳邊搖能聽到聲音就不會(huì)影響到。③先用溶劑將檢測(cè)池沖洗一下,具體的試樣用什么試樣;若不沖洗,將檢測(cè)池卸下,看燈能量,若能量還可以(有個(gè)幾千),可能得清洗光路。首先還是請(qǐng)工程師來清潔,因?yàn)橐謇淼牧慵谔綔y(cè)器下面有一個(gè)黑色的碎片,中間有一條縫,而且那一塊的螺絲都是八角的,卸起來很麻煩。④拿出5個(gè)樣品盤,可以看到里面有一個(gè)黑色凸起(看不清是用電筒),平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸的。伸手就能卸下來,里面有一個(gè)小白圈(用多了自然就黑了),換一個(gè)新的就好了,一般只有10個(gè)才能買儀器。