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PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備
試劑準(zhǔn)備區(qū):主要進(jìn)行試劑的制備、分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過(guò)其它區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑。本區(qū)主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、振蕩器等。
PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)
試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)設(shè)緊急洗眼器,以保證操作人員的安全。PCR實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇。
PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——標(biāo)本制備區(qū)
由于在樣本混合、核酸純化過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——擴(kuò)增區(qū)
為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的是,所有經(jīng)過(guò)檢測(cè)的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開(kāi)。
PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源,因此必須注意避免通過(guò)本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí),必須使用洗板,廢液必須收集至1 mol/L HCl中,并且不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒,而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。
PCR實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則
由于紫外照射的距離和能量對(duì)去污染的效果非常關(guān)鍵,因此可使用可移動(dòng)紫外燈(254nm波長(zhǎng)),在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上60~90cm內(nèi)照射。
PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn),PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)簡(jiǎn)稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA,可看作生物體外的特殊DNA。通過(guò)DNA基因追系統(tǒng),能迅速掌握生物體內(nèi)的病毒含量,其精準(zhǔn)度高達(dá)納米級(jí)別。
幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況,試劑準(zhǔn)備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),空間可以相對(duì)小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應(yīng)大一些。
PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測(cè)定。本區(qū)主要設(shè)備加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。
各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流與氣流,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾,防止氣溶膠擴(kuò)散對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程造成污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——標(biāo)本制備區(qū)
由于在樣本混合、核酸純化過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。