PCR實驗室是分子診斷的基礎(chǔ)，也是進(jìn)行PCR實驗的必備場所。近些年，分子診斷行業(yè)快速發(fā)展，對PCR的認(rèn)識又進(jìn)入到了一個新的階段，但是基于實驗室的基本知識仍然是非常重要的一環(huán)。

PCR實驗室注意事項——標(biāo)本制備區(qū)

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

PCR實驗室注意事項——擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護(hù)。

PCR實驗室注意事項——擴(kuò)增區(qū)

為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是，所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。

PCR實驗室注意事項——擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

本區(qū)是主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源，因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物時，必須使用洗板，廢液必須收集至1 mol/L HCl中，并且不能在實驗室內(nèi)傾倒，而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實驗室的地方棄掉。

PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。

PCR實驗室工作基本原則

實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

PCR實驗室布局

不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)，擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

擴(kuò)增區(qū)：主要進(jìn)行DNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑準(zhǔn)備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。本區(qū)主要設(shè)備有：擴(kuò)增儀、冰箱、離心機(jī)、加樣器等。