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熒光定量PCR代理價(jià)格合理 勱博儀器

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發(fā)布時(shí)間:2020-10-04 16:57  






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據(jù)介紹,該發(fā)明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測(cè)試劑及其制備方法與用途,設(shè)計(jì)合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽(yáng)性對(duì)照,并利用該引物及探針建立了一種快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高的熒光 PCR 檢測(cè)體系,可在 3~4 小時(shí)內(nèi)從被檢樣本中快速、準(zhǔn)確、特異、安全、簡(jiǎn)便地檢出 ASFV CP530R 基因,可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測(cè)。研究表明,每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。

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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。但在許多情況下,研究者們已不再滿足于得知某一特異DNA序列的存在與否,他們更著眼于對(duì)其進(jìn)行精i確的核酸定量。從 20 世紀(jì) 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開始在我國(guó)快速蔓延開來,對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。因此,本方法為快速診斷非洲病毒,提供了有力的技術(shù)手段。



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一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段:熒光背景信號(hào)階段,熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。生產(chǎn)上常見到的則是不經(jīng)計(jì)算,只是在消毒i藥將舍內(nèi)全部噴濕即可,人走后地面馬上干燥,這樣的消毒效果是很差的,因?yàn)橄緄藥無法與掩蓋在深層的病原接觸。在熒光背景信號(hào)階段,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋, 無法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段, PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便,在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念:熒光閾值和 CT值.

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什么是熒光定量PCR?常規(guī)PCR中,擴(kuò)增產(chǎn)物(擴(kuò)增子)是通過終點(diǎn)法來分析檢測(cè),即PCR反應(yīng)結(jié)束后,DNA通過瓊脂糖凝膠電泳,然后進(jìn)行成像分析。而熒光定量PCR可以在反應(yīng)進(jìn)行過程中進(jìn)行累積擴(kuò)增產(chǎn)物的分析和檢測(cè),即“實(shí)時(shí)”。不同的核酸序列,哪怕僅有一個(gè)堿基的差異,也會(huì)體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。在反應(yīng)體系中加入熒光分子,通過熒光信號(hào)的按比例增加來反應(yīng)DNA量的增加,使PCR產(chǎn)物的實(shí)時(shí)檢測(cè)成為可能。滿足實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡臒晒饣瘜W(xué)物質(zhì)包括DNA結(jié)合染料和熒光標(biāo)記的序列特異引物或探針;專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測(cè)模塊,用于監(jiān)測(cè)擴(kuò)增時(shí)的熒光,檢測(cè)到的熒光信號(hào)反映了每個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。


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一、充分認(rèn)識(shí)養(yǎng)殖環(huán)節(jié)非洲排查的重要意義。廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠熒光定量PCR相對(duì)定量可以對(duì)每個(gè)樣本中模版的其實(shí)水平之間的差異進(jìn)行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對(duì)水平不用使用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以確定。強(qiáng)化養(yǎng)殖環(huán)節(jié)非洲排查,是當(dāng)前疫情防控的關(guān)鍵措施,是及時(shí)發(fā)現(xiàn)和消除風(fēng)險(xiǎn)的重要手段,有利于非洲i疫情“早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早處置”,有利于降低運(yùn)輸、屠宰、生產(chǎn)加工等下游環(huán)節(jié)疫情傳播風(fēng)險(xiǎn)。二、鼓勵(lì)規(guī)模豬場(chǎng)和種豬場(chǎng)開展非洲自檢。鼓勵(lì)規(guī)模豬場(chǎng)、種豬場(chǎng)配置檢測(cè)儀器設(shè)備,規(guī)范使用經(jīng)我部批準(zhǔn)或經(jīng)中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心比對(duì)符合要求的檢測(cè)方法,自行開展非洲檢測(cè)。

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臨床上非洲真正感i染方式往往是通過豬與豬、豬與環(huán)境等直接接觸感i染非洲,即自然感i染。自然感i染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,非洲自然感i染情況下,唾液可以早于血液3~20天檢測(cè)出非瘟病毒,便于早期篩查!。PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。豬群一旦出現(xiàn)不吃料、減料、輕微發(fā)熱等疑似發(fā)病癥狀,可立即采集豬的唾液、肛腸拭子等混檢,有助于疫情的提早發(fā)現(xiàn)。如果在血液中檢測(cè)到了非洲病毒,說明豬場(chǎng)很有可能已經(jīng)較大面積感i染非洲病毒。


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目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進(jìn)行預(yù)防,現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對(duì)非洲病毒進(jìn)行檢測(cè),根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。農(nóng)i業(yè)部要求豬場(chǎng)、飼料廠和屠宰廠和流通環(huán)節(jié)必須進(jìn)行非洲病毒檢測(cè)。屠宰廠(場(chǎng))生產(chǎn)設(shè)施設(shè)備和環(huán)境一旦被污染,病毒更易長(zhǎng)期存活,更易在生豬和豬肉產(chǎn)品中循環(huán)擴(kuò)增,成為病毒的“儲(chǔ)存器”“擴(kuò)增器”。豬場(chǎng)、飼料廠、屠宰廠和流通環(huán)節(jié)用我們的ASFV LAMP現(xiàn)場(chǎng)可視化快速檢測(cè)試劑盒對(duì)非洲病毒進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果,對(duì)發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對(duì)疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。從而對(duì)非洲進(jìn)行有效的防控。i大限度減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。

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PCR檢測(cè)同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設(shè)計(jì),該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測(cè)到已知所有22種p72病毒基因型的多個(gè)毒株。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測(cè)PCR反應(yīng)的最終擴(kuò)增產(chǎn)物,因此用此終點(diǎn)法對(duì)PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。PCR檢測(cè)雖不需要熒光顯微設(shè)備,但也需要相關(guān)設(shè)備,可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速非瘟檢測(cè)技術(shù)。


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