02、緩沖溶液的選擇與計算

為了保證緩沖溶液有足夠強的緩沖能力，在配制緩沖溶液時，需要做到：

為使共軛酸堿對的濃度比接近于1，應根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對，使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。

例如，生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖溶液，已知H2PO4-的pKa2=7.21，因此，H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對。如若配制PH=9.0的緩沖溶液，則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對（pKa（NH4 ）=9.25）。

常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見的緩沖體系有：

1、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc）

2、弱堿和它的鹽（NH3·H2O---NH4Cl）

3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。

而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris（三羥）等系統(tǒng)，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學反應。

三羥（Tris）是一種應用非常廣泛的有機試劑，它的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。它及其衍生物被廣泛應用于生物化學和分子生物學實驗中的緩沖液的制備，可用于制作、有機合成、生物緩沖劑等。其中在生化實驗中，許多蛋白質(zhì)及核酸相關的實驗都需要用Tris作為生物緩沖劑。它甚至有超過磷酸鹽緩沖液的趨勢，本文將對其衍生緩沖液進行簡述。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動，直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20℃。

10mg/mlRnase（無DNase）（DNase－free RNase）：溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的Tris－HCl調(diào)pH至7.5，于-20℃貯存。（配制過程中要戴手套）