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Tris中文品名為三羥;氨基;緩血酸胺;2-氨基-2-(羥)-1,3-丙二醇。是一種白Chemicalbook色結(jié)晶或粉末。溶于乙醇和水,微溶于、苯,不溶于、,對銅、鋁有腐蝕作用,有刺激性的化學(xué)物質(zhì)。緩沖特性Tris為弱堿,在25℃下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。TrisChemicalbook堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應(yīng)注意溫度對于Tris的pKa的影響。
表面活性劑是指加入少量能使其溶液體系的界面狀態(tài)發(fā)生明顯變化的物質(zhì),具有固定的親水親油基團(tuán),在溶液的表面能定向排列。表面活性劑的應(yīng)用可分為民用和工業(yè)應(yīng)用。民用表面活性劑中有2/3用于個人保護(hù)用品,工業(yè)用表面活性劑是民用表面活性劑以外用于各工業(yè)領(lǐng)域的表面活性劑總和。表面活性劑的分子結(jié)構(gòu)具有兩親性:一端為親水基團(tuán),另一端為疏水基團(tuán);親水基團(tuán)常為極性基團(tuán),如羧酸、磺酸、硫酸、氨基或胺基及其鹽,羥基、酰胺基、醚鍵等也可作為極性親水基團(tuán);而疏水基團(tuán)常為非極性烴鏈,如8個碳原子以上烴鏈。Tris含有三個羥基和一個氨基,均為良好的親水基團(tuán),因此Tris也是合成表面活性劑的重要中間體。
蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要,合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。
當(dāng)我們純化蛋白時,的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活,或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個純化過程中要始終保持可溶性和活性。
因此設(shè)計一個防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了,尤其會凸顯在實驗結(jié)果上。在設(shè)計緩沖buffer時應(yīng)考慮以下幾個因素:pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據(jù)你的目的蛋白進(jìn)行優(yōu)化,并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標(biāo)準(zhǔn)。
很多實驗的pH值設(shè)定在 7.4以模仿生物條件。假如你的蛋白在這個pH值下是穩(wěn)定的,那就非常棒了!如果不是,就需要改變pH值找到目的蛋白在溶液中處于可溶性且不會降解的狀態(tài)。
一個經(jīng)驗法則是:蛋白在它等電點pI附近的pH值溶液中會表現(xiàn)得不易溶解,因為蛋白在其等電點的pH值溶液中表面沒有凈電荷,從而容易聚集。這里推薦用Expasy的ProtParam工具快速簡便地計算蛋白等電點pI值,只要提交蛋白序列即可。