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PCR實驗室的設(shè)計原則
使用實時熒光PCR儀,擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并;
采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。
PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備
擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。
PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)
本區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產(chǎn)物時,必須使用洗板,廢液必須收集至1 mol/L HCl中,并且不能在實驗室內(nèi)傾倒,而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實驗室的地方棄掉。
PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備
樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
PCR實驗室裝飾
實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
PCR實驗室布局
實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
PCR實驗室注意事項——標(biāo)本制備區(qū)
由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。
實驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動。
PCR實驗室又叫基因擴增實驗,PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA,可看作生物體外的特殊DNA。通過DNA基因追系統(tǒng),能迅速掌握生物體內(nèi)的病毒含量,其精準(zhǔn)度高達(dá)納米級別。