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分析試劑盒配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 溫育:操作同3。 洗滌:操作同5。 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
就是具有自動(dòng)清洗程序的全自動(dòng)生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman 全自動(dòng)生化分析儀CX4,它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時(shí)由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低,使試劑吸針、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈、吹不干,從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染、試劑間交叉污染,是檢驗(yàn)結(jié)果偏離。另一個(gè)值得注意的問(wèn)題是許多生化儀器由于長(zhǎng)期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的磨損加重或的“特氟龍”吸頭不及時(shí)更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實(shí)際間項(xiàng)目污染的一個(gè)重要原因。
在全自動(dòng)生化分析儀使用中,我們發(fā)現(xiàn)一個(gè)項(xiàng)目會(huì)影響緊隨其后項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果,造成這種影響的原因之一是一種實(shí)際中含有另一試驗(yàn)的測(cè)定物質(zhì)而直接干擾其測(cè)試結(jié)果。比如:在TP試劑中含有大量的CUSO4,如果將Cu放在TP項(xiàng)目的后面檢測(cè),會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項(xiàng)目后面,TBA放在含有膽酸鹽的項(xiàng)目后面都會(huì)使檢測(cè)結(jié)果偏高或重復(fù)性差。
隨著全自動(dòng)生化分析儀的普及,“開(kāi)瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視,但是就目前有的試劑方法學(xué)來(lái)講,還達(dá)不到人們所要求的試劑開(kāi)瓶后在儀器內(nèi)放很長(zhǎng)時(shí)間不需要定標(biāo),比如ALP、TP、GSP、等PH為堿性的試劑,開(kāi)瓶后試劑會(huì)吸收空氣中的二氧化碳,使試劑本身的PH值下降,如果長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)瓶不定標(biāo)或者校準(zhǔn),會(huì)使檢測(cè)結(jié)果發(fā)生偏離,在國(guó)外有的項(xiàng)目有明文規(guī)定,必須72小時(shí)之內(nèi)定標(biāo),比如BUN。但是在國(guó)內(nèi)的某些實(shí)驗(yàn)室為了方便,很長(zhǎng)時(shí)間都不作校準(zhǔn),導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的不準(zhǔn)確,解決辦法:a、了解試劑特性。及時(shí)對(duì)部份項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn),對(duì)于每天標(biāo)本量不多的醫(yī)院,可按照1-2天的用量取用試劑放入儀器。