高效液相色譜

高效液相色譜法是色譜法的一個重要分支，應用范圍十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測定，因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中，可用氣相色譜分析的約占20% ，而80%則需用高效液相色譜來分析。HPLC具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點，已成為化學、醫(yī)學、工業(yè)、農(nóng)學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。

色譜柱的安裝

（1）拆開柱包裝盒，確認色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。

（2）擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。

（3）按柱管上標示的流動相流向，將色譜柱的入口端通過連接管與進樣閥出口相連接(如，條件允許，建議在柱前使用保護柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57 mm、內(nèi)徑為0.1～0.3 mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時一定要設法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止。

液相色譜柱的再生

因為，色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來說是柱效的下降。

1.反向柱的再生：

2.正相柱的再生：

3.離子交換柱的再生：

長時間在緩沖溶液中使用和進樣，將導致色譜柱離子交換能力下降。用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

特別說明：

再生過程必須隨時關注柱壓變化，柱壓過高易導致硅膠變形與開裂及鍵合相極性端連接順序紊亂，同時要保證再生時間足夠。再生時盡量選擇不具備在線脫氣的獨立泵送系統(tǒng)色譜儀器進行