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重組酶聚合酶擴增技術是近年來建立起的一種新的核酸恒溫擴增技術,具有操作簡單、靈敏度高、特異性強、可在短時間內快速擴增出目的片段等優(yōu)點,在動物疾病早期診斷、現(xiàn)地檢測、進出口快速檢疫等方面具有良好的應用前景。
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重組酶聚合酶擴增(RPA)技術基于重組酶聚合酶介導的擴增原理,體外模擬生物體內 DNA 復印,在恒溫條件下即可對目的片段進行擴增,特別適用于快速檢測,特別適用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農業(yè)等領域,已被成功應用到多種病原的快速檢測上。
重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應形成并啟動 DNA合成,對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的 DNA鏈與SSB結合,防止進一步替換。在這個體系中,由兩個相對的引物起始一個合成事件。
RPA能實現(xiàn)多重化嗎
可以。需要注意的是,RPA反應的引物總量(nmol)不要超標太多。如果在一個反應中使用兩個以上的擴增引物,就應該控制不同引物的量。另外,我們應當事先考慮好檢測多個擴增事件的探針、設備以及熒光團的兼容性。