武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。

 三．實驗材料

   儀器設(shè)備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養(yǎng)皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養(yǎng)箱或溫室；

   材料煙1草無菌苗、豌豆幼苗。

   試劑

   （1）MS培養(yǎng)基，植物激1素：NAA、6-BA等；

   （2）飽和漂液（次氯1酸鈉）；

   （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

   （4）無菌水

   四．實驗步驟

   豌豆苗的莖尖培養(yǎng)

   ⑴取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯1酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無菌）用無菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。

4）  吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min，取上清即可檢測。

總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。

為了保證檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本1好在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。

另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。

假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結(jié)合物。展片、貼片打開水浴鍋，使水溫維持在40-45℃，另準(zhǔn)備30%乙醇溶液。但在HBsAg的檢測中應(yīng)注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應(yīng)性，這也是用單抗作夾心法應(yīng)注意的問題。

　　雙抗1體夾心法測抗原的另一注意點是類風(fēng)1濕因子（RF）的干擾。在2001年修訂的歐洲心臟病學(xué)會心衰診療指南中，已經(jīng)把腦鈉肽作為心衰診斷的工具。RF是一種自身抗1體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結(jié)合。用作雙抗1體夾心法檢測的血1清標(biāo)本中如含有RF，它可充當(dāng)抗原成份，同時與固相抗1體和酶標(biāo)抗1體結(jié)合，表現(xiàn)出假陽性反應(yīng)。采用F（ab'）或Fab片段作酶結(jié)合物的試劑，由于去除了Fc段，從而消除RF的干擾。雙抗1體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標(biāo)（參見6.2）。

　　雙抗1體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。