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PCR實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)設(shè)置
要完成一組PCR實(shí)驗(yàn),通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析4個(gè)實(shí)驗(yàn)過程。
這4個(gè)實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房應(yīng)相鄰布置,組成一個(gè)獨(dú)立的PCR實(shí)驗(yàn)區(qū)。標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)區(qū)包括:試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。
PCR實(shí)驗(yàn)室整體平面布局某醫(yī)院PCR實(shí)驗(yàn)室平面布局如圖1所示,整個(gè)區(qū)域有一個(gè)公用走廊,每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制,使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染,并且降低擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。
試劑準(zhǔn)備區(qū)該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。
試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
試劑準(zhǔn)備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱,計(jì)算冷負(fù)荷時(shí),需要將它們計(jì)算在內(nèi)。
房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)正壓狀態(tài),以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入,造成污染。
標(biāo)本制備區(qū)該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。
標(biāo)本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱,計(jì)算冷負(fù)荷時(shí),需要將它們計(jì)算在內(nèi)。在標(biāo)本制備區(qū),還需要配備生物安全柜,用于進(jìn)行提取核酸的操作。
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裝飾裝修
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實(shí)驗(yàn)區(qū)地面采用PVC卷材,墻體、吊頂采用夾芯玻鎂彩鋼板。
除地面外,機(jī)電區(qū)和實(shí)驗(yàn)區(qū)的裝修保持一致。
實(shí)驗(yàn)區(qū)采用成品不銹鋼潔凈室專用門,配有中空玻璃觀察窗、門鎖、把手、閉門器、升降密封條、電子互鎖。
傳遞窗采用不銹鋼傳遞窗,配有電子互鎖、紫外燈,預(yù)留接口可根據(jù)需要增加排風(fēng)、消毒液噴淋等。
PCR實(shí)驗(yàn)部分不設(shè)置外窗,實(shí)驗(yàn)室光源為人工光源。