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磁性分離方法基本只包括2個步驟:1. 用磁性納米粒子標(biāo)記目標(biāo)分子或細胞;2. 通過磁分離裝置分離出目標(biāo)分子或細胞。利用磁性納米粒子分離的例子之一是把特異性與磁性納米粒子結(jié)合,可將磁性納米粒子連接在特定細胞上,外加磁場即可快速將結(jié)合磁性納米粒子的細胞分離或進行分析。這樣的方法特異性高、分離迅速、重現(xiàn)性好。又如,將葡萄糖-DEAE包裹在磁性納米粒子表面,利用帶正電荷的DEAE與帶負電荷的核酸之間的電荷吸附作用,通過離子交換,在細菌裂解上清中提純質(zhì)粒。
按表面基團分為:氨基磁性微球、羧基磁性微球、羥基磁性微球、環(huán)氧基磁性微球、磺酸基磁性微球、鏈酶親和素磁性微球、巰基磁性微球等。 磁性微球在診斷和檢測中的應(yīng)用 在的檢測和早期診斷中,生物標(biāo)記物濃度的動態(tài)范圍通常比較寬,高濃度標(biāo)記物的存在通常對低濃度的檢測造成干擾。山東大學(xué)的唐波等人利用羧基磁性微球,通過EDC偶聯(lián)到氨基修飾的發(fā)卡形DNA鏈上,構(gòu)建了雙功能探針。
結(jié)合緩沖液一般采用醇類結(jié)合,比如乙醇,有些廠家緩沖液是直接使用柱法的試劑轉(zhuǎn)換成磁珠法的,會發(fā)現(xiàn)在柱法中表現(xiàn)很好的試劑,在磁珠法中得率很低。這是因為柱法不但其硅膠柱具備結(jié)合核酸的能力,還有類似「分子篩」的效果。而磁珠法一般是通過靜電吸附、疏水作用來結(jié)合核酸,所以對于結(jié)合液的結(jié)合能力要求會更高,一般可以通過提高醇的比例來增強結(jié)合能力,同時,也要提高離液鹽(胍鹽、鈉鹽等)的濃度來促進核酸與磁珠的結(jié)合。
二氧化硅屬于酸性氧化物,在強堿性的溶液中很容易被腐蝕,所以在配制相應(yīng)的緩沖液時,應(yīng)注意pH值,一般認為pH值不宜大于9,否則有可能造成磁性微球的破壞,表面功能基團損失,導(dǎo)致提取效率下降甚至磁性微球不工作。這也是二氧化硅磁性微球的一個弱點,無法耐堿性條件,但二氧化硅磁性微球抗機械強度強,化學(xué)穩(wěn)定性比較好,核酸吸附能力強,目前在核酸提取中大量應(yīng)用。