蛋白結(jié)晶板實驗研究

大分子生物藥以晶體形式作為給藥的方式具有穩(wěn)定性高,有效成分濃度高以及容易實現(xiàn)的可控性釋放等許多優(yōu)點.然而,,截至2004年的150多種生物藥中,以晶體為其主要的生產(chǎn)和銷售形態(tài)的只有胰島素.造成這種情況的主要技術原因是因為蛋白質(zhì)結(jié)晶和小分子結(jié)晶相比具有更為復雜的結(jié)晶環(huán)境和影響因素,大規(guī)模生產(chǎn)蛋白質(zhì)晶體在方法和技術上還很不成熟。

蛋白質(zhì)晶體板

進而進行衍射得到蛋白質(zhì)結(jié)構相關信息.蛋白質(zhì)結(jié)晶需要經(jīng)歷從未飽和區(qū)經(jīng)亞穩(wěn)區(qū)至形核區(qū)的形核過程以及從形核區(qū)到亞穩(wěn)區(qū)的生長成熟過程.在整個蛋白質(zhì)結(jié)晶過程中,形核過程是至關重要的一步，形核勢壘低.因而形核劑的使用對于難結(jié)晶蛋白或者起始濃度過低的蛋白質(zhì)結(jié)晶具有重要意義.隨著結(jié)構生物學的發(fā)展,形核劑在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的研究仍是結(jié)晶方法學領域的熱點問題。

蛋白結(jié)晶板

提出了一個適用于蛋白質(zhì)結(jié)晶過程的基于晶體形狀結(jié)構的群體粒數(shù)衡算模型.在該模型中,蛋白質(zhì)晶體的形狀被定量描述為每個晶面到晶體幾何中心的距離,由此提出了基于蛋白質(zhì)晶形的多維粒度分布,即形狀分布的概念.應用非線性回歸的方法,確定了四方系溶菌酶的結(jié)晶動力學方程參數(shù).結(jié)合本提出的基于晶體形狀結(jié)構的群體粒數(shù)衡算模型。

溫度控制作為調(diào)控蛋白質(zhì)結(jié)晶過程的手段,在結(jié)晶實驗中被廣泛采用.熱歷史 效應作為蛋白質(zhì)結(jié)晶實驗中新的影響因素,已被越來越多的科學家所重視.控制溫度可以改變蛋白質(zhì)的溶解度,進一步改變?nèi)芤旱倪^飽和度,從而影響結(jié)晶過程.我 們簡要總結(jié)了溫度對蛋白質(zhì)結(jié)晶的影響及應用溫度技術控制蛋白質(zhì)晶體生長的各種技術,為蛋白質(zhì)結(jié)晶工作提供理論和實驗依據(jù).。

生長蛋白質(zhì)晶體是X射線衍射技 術解析蛋白質(zhì)分子結(jié)構的主要瓶頸問題之一.影響蛋白質(zhì)結(jié)晶的因素很多,其中溫度是影響蛋白質(zhì)結(jié)晶的重要因素,但在實踐中并未受到廣泛重視.總結(jié)了恒溫和變 溫對蛋白質(zhì)可結(jié)晶性和晶體質(zhì)量的影響,發(fā)現(xiàn)溫度控制既可以獲得更多的蛋白質(zhì)結(jié)晶條件,又可以提高蛋白質(zhì)晶體質(zhì)量,因此,溫度控制是蛋白質(zhì)結(jié)晶工作中應當考 慮的重要因素。