人ELISA試劑盒的原理及優(yōu)勢(shì)：

　　1、ELISA是以immune學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、antibody的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的有效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

　　2、由于抗原、antibody的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。

　　3、Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在immune學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。

　　4、ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血1清或血漿中的抗人類HEV病毒Mantibody ELISA檢測(cè)。

　　5、ELISA的基礎(chǔ)是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或antibody仍保持其immune學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或antibody既保留其immune學(xué)活性，又保留酶的活性。

轉(zhuǎn)移RNA

轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）在蛋白質(zhì)合成過程中負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸、解讀mRNA遺傳密碼。tRNA占細(xì)胞總RNA的10%~15%，絕大多數(shù)位于細(xì)胞質(zhì)中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鑒定。

tRNA一級(jí)結(jié)構(gòu)具有以下特點(diǎn)：

①是一類單鏈小分子RNA，長73~95nt（共有序列76nt），沉降系數(shù)4S。

②是含稀有堿基zui多的RNA，含7-15個(gè)稀有堿基（占全部堿基的15%~20%），位于非配對(duì)區(qū)。

③5′末端堿基往往是鳥piao呤。

④3'端是CCA序列，其中的腺苷酸常稱為A76，其3’—OH是氨基酸結(jié)合位點(diǎn)。

RNA試劑盒注意事項(xiàng)

所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。

RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA不純，需電泳檢測(cè)。

使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購買專1用提取試劑盒， 如果不是專1用試劑盒，或許能提出RNA，但不能確保其質(zhì)量以及完整性，會(huì)影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析、分子克1隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

當(dāng)前提取效果好的是RNA提取試劑盒，但其售價(jià)較高，單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大，對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒有必要購買，當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒，但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長的問題（如果碰上國內(nèi)無貨的時(shí)候，要從國外發(fā)貨，會(huì)等很長一段時(shí)間）。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯(cuò)，還可以

回收產(chǎn)物的檢測(cè)

1.紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)DNA在OD260處有明顯吸收峰，當(dāng)OD260=1時(shí)，相當(dāng)于大約50 ng/μL雙鏈DNA、40 ng/μL單鏈DNA。OD260/OD280≈1.6~1.9時(shí)，說明DNA純度較高。若洗脫時(shí)不用洗脫緩沖液，而是用去離子水，會(huì)使比值偏低，因?yàn)殡x子的存在會(huì)影響吸光度。但不表示純度低。

2.SYBR法檢測(cè)取回收產(chǎn)物1 μL，與1 μL SYBR染料混勻，于熒光透1視儀下觀察是否有黃綠色熒光。

3.瓊脂糖凝膠電泳法檢測(cè)取回收產(chǎn)物5 μL，與10×Loading Buffer混勻，DNA Marker加5 μL，電泳后凝膠成像觀察。5 μL DNA Marker相當(dāng)于每個(gè)條帶50 ng DNA，觀察目的條帶亮度大致為Marker的兩倍，則大致估算其濃度約為20 ng/μL。