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山東富舜新材料科技有限公司座落在美麗的“泉城”濟(jì)南。公司是集化學(xué)科研、開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)為一體的綜合型企業(yè)。我公司擁有先進(jìn)的生產(chǎn)設(shè)備,完善的產(chǎn)品檢測(cè)手段和質(zhì)量保證體系。我公司的員工具有較強(qiáng)的責(zé)任感。經(jīng)過多年的發(fā)展,現(xiàn)已形成添加劑、阻燃劑、和化工助劑三大類上百個(gè)品種。公司本著“誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)、專注品質(zhì)”的宗旨,參與到激烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中來,以好的產(chǎn)品質(zhì)量,優(yōu)惠的產(chǎn)品價(jià)格,令人滿意的銷售服務(wù),贏得大家的支持與信賴。山東富舜新材料科技有限公司的誠(chéng)信、實(shí)力和產(chǎn)品質(zhì)量獲得業(yè)界的認(rèn)可。歡迎各界朋友蒞臨參觀、指導(dǎo)和業(yè)務(wù)洽談。常規(guī)染色脫色方法耗時(shí)較長(zhǎng),但檢測(cè)靈敏度更高,染色效果更加穩(wěn)定。
考馬斯亮藍(lán)染色?使用說明:
? 1.?常規(guī)染色脫色方法:
? a.?電泳結(jié)束后,取凝膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。
?b.?置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng),室溫染色1小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間。? 注:具體的染色時(shí)間取決于凝膠的厚度和染色時(shí)的溫度。凝膠較厚,溫度較低,則染色時(shí)間宜適當(dāng)延長(zhǎng)。凝膠較薄,溫度較高,則染色時(shí)間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近,在染色液中幾乎看不清凝膠時(shí),可以認(rèn)為已染色充分。染色2-4個(gè)小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)對(duì)終的染色效果產(chǎn)生fu面影響??捎糜赟DS-PAGE或非變性PAGE蛋白電泳的快速染色,或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測(cè)。?
c.?倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用至少2-3次。
? d.?加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液,確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。
? e.?置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動(dòng),室溫脫色4-24小時(shí)。期間更換脫色液2-4次,直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去,并且蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時(shí)后即可出現(xiàn)。? 注:脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙,可以使部分染料吸附在吸水紙上,加快脫色。脫色時(shí)間過長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。另外微波爐加熱導(dǎo)致的高溫會(huì)引起染色液和脫色液中的yi酸的揮發(fā),最hao能在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。
? f.?完成脫色后,可以把凝膠保存在水中,用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會(huì)發(fā)生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保? 存在含20%甘油的水中。長(zhǎng)期保存可以制備干膠。?
2.?快速染色脫色方法:?
a.?電泳結(jié)束后,取膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中,微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。通常對(duì)于膠濃度大于10%的膠比較堅(jiān)韌,在發(fā)生煮沸時(shí)不易破損;對(duì)于膠濃度小于10%的膠,宜盡量避免煮沸,以免出現(xiàn)膠碎裂的情況。
?b.?隨后在染色液溫度較高的情況下,在室溫?fù)u床上搖動(dòng)5-10分鐘。
? d.?加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。
? e.?微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。
? f.?隨后在脫色液溫度較高的情況下,在搖床上搖動(dòng)5-10分鐘。此時(shí)通??梢杂^察到比較清楚的蛋白條帶。
? g.?更換新鮮的脫色液,重復(fù)步驟e和步驟f,直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去,蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。?
山東富舜新材料科技有限公司座落在美麗的“泉城”濟(jì)南。公司是集化學(xué)科研、開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)為一體的綜合型企業(yè)。我公司擁有先進(jìn)的生產(chǎn)設(shè)備,完善的產(chǎn)品檢測(cè)手段和質(zhì)量保證體系。我公司的員工具有較強(qiáng)的責(zé)任感。經(jīng)過多年的發(fā)展,現(xiàn)已形成添加劑、阻燃劑、和化工助劑三大類上百個(gè)品種。公司本著“誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)、專注品質(zhì)”的宗旨,參與到激烈的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中來,以好的產(chǎn)品質(zhì)量,優(yōu)惠的產(chǎn)品價(jià)格,令人滿意的銷售服務(wù),贏得大家的支持與信賴。山東富舜新材料科技有限公司的誠(chéng)信、實(shí)力和產(chǎn)品質(zhì)量獲得業(yè)界的認(rèn)可。歡迎各界朋友蒞臨參觀、指導(dǎo)和業(yè)務(wù)洽談??捡R斯亮藍(lán)G-250在酸性溶液中為棕紅色,當(dāng)它與蛋白質(zhì)通過范德華鍵結(jié)合后,變?yōu)樗{(lán)色,且在蛋白質(zhì)一定濃度范圍內(nèi)符合比爾定律,可在595nm處比色測(cè)定。
天然染料一般來源于植物、動(dòng)物和礦物質(zhì),以植物染料為主。植物染料是從植物的根、莖、葉及果實(shí)中提取出來。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速,常用來作為蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。如:靛藍(lán)、茜紅花、桑、茶等。動(dòng)物染料數(shù)目較少,主要取自貝殼類動(dòng)物和胭脂蟲體內(nèi),如:蟲(紫)膠、胭脂蟲紅、蟲胭脂等。礦物染料是從礦物中提取的有色無機(jī)物質(zhì),如鉻黃、群青、錳棕等。近年來人們發(fā)現(xiàn)細(xì)菌、真菌、霉菌等微生物產(chǎn)生的色素也可作為天然染料的來源
鑒別方法
(1)取該品0.1g溶于100mL水中,呈藍(lán)色澄清溶液。
(2)該品微溶于乙醇,不溶于油脂,具有酸性染料的特性,能使動(dòng)物纖維著色。
(3)100mL含有0.001g本品的0.02mol/L銨溶液的吸收波長(zhǎng)為630±2nm。
(4)取該品水溶液,做紙上層析,其主色點(diǎn)的Rf值應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品相同。
紙上層析條件:
展開劑 ;無水乙醇;氨水(1%)=6:2:3
溫 度 20~25℃
試液濃度 0.g/100mL
試液用量 2μL
展開劑前沿上升限度 160mm
使用量:一般為0.025g/kg。
.使用方法:將準(zhǔn)確稱量的本品置于容器中,逐漸加入適量溫水,并不斷攪拌使之完全溶解,所得溶液即可用于著色。
使用過程中應(yīng)注意避免或減少酸、減、氧化計(jì)、還原計(jì)、金屬離子、微生物等物質(zhì)的不良影響,并注意免受高溫與暴曬,以防褪色或變色。
復(fù)合著色劑的使用:根據(jù)需要,可將本品與本公司生產(chǎn)的其它色澤的著色劑按適當(dāng)比例配置各種不同的顏色。