低溫生物知多少？

實驗室的傳代保藏過程

1. 按說明書要求復溶菌粉，轉種于適當?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內（G1），復壯后轉接至平板上，并于適當溫度下培養(yǎng)適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉接斜面作為工作用。此時，保藏為第2代，但工作用則為第三代。

3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當溫度下培養(yǎng)適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代轉種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經適當溫度下培養(yǎng)適當時間后用作工作用（W3）。

5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉種后的G2經滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用代數(shù)小于5時，可直接用上一代工作用轉接下一代工作用，如W3可直接轉接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應用其它方法。

                                                                什么是低溫生物的保藏？

將需要保藏的，接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，菌絲長滿斜面時，用硫酸紙包扎棉塞或者硅膠塞，放置在4℃的冰箱中保藏，叫做斜面（）低溫保藏法。由于微生物的新陳代謝活動未停止，試管內培養(yǎng)基易失水變干。因此，保藏時間較短，不適于長期保藏。每隔3～6個月應轉管一次。草菇不耐低溫，需保藏在10～12℃之間?；蛟诓莨骄渖瞎嘧?～4毫升的防凍劑（10%的甘油）。當菌絲長滿斜面后，在無菌條件下，用無菌橡皮塞代替棉塞，并用石蠟密封，即可在室溫或冰箱中保藏。這種方法可防止雜菌污染，隔絕氧氣，避免培養(yǎng)基干燥，使用方便。據(jù)測定，保藏3年的生活力仍很旺盛。

                                                       低溫生物菌種的冰凍是怎樣的？

生物體的新陳代謝是隨著溫度的降低而減緩的。如果低溫在0℃以上，這個減緩過程一般是可逆的，即溫度回升以后，新陳代謝的速度也隨之恢復。但如溫度降至冰點以下時，生物體常因結冰而發(fā)生不可恢復的損傷。因為所有的生物體體液都含有大量的水（一般在80%左右），細胞器也都懸浮于水溶液中，新陳代謝過程都是在水溶液或膜和水溶液的界面上進行的，所以在結冰的過程中，一方面由于水的晶體──冰晶硬度較大，對于生物體內的精細結構會造成機械損傷；另一方面由于水結冰，使細胞內失去了大量可利用的水，造成脫水現(xiàn)象，從而使精細結構發(fā)生破壞。

                                                           低溫生物菌種了解多少？

研究在低溫條件下生命活動的生物化學規(guī)律的新興學科，是低溫生物學的重要基礎。例如，在某些冬眠狀態(tài)的昆蟲體液中，甘油含量可高達25%，以致在-35℃的狀況下也不會冰凍。另一方面，利用低溫下變化減慢，來研究在常溫下變化較快的一些生物化學反應。如在酶的催化、蛋白質和核酸在溶液中的空間構象變化中。某些中間變化常溫下在千分之一秒的時間內即可完成，用一般方法難以探討，而在含有添加劑使溫度降至-40℃左右的溶液中，反應速度大為減慢就可用常規(guī)方法進行研究。