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組織研磨機(jī)的工作原理
組織研磨機(jī)是一款名副其實(shí)的實(shí)驗(yàn)室多功能樣品制備儀器,是專門為“少量樣品”而推出的新產(chǎn)品。·提取核酸/蛋白質(zhì)低溫研磨樣品能夠有效抑制核酸降解、保留蛋白質(zhì)活性。高通量組織研磨機(jī)可在1-3分鐘內(nèi)對(duì)硬性、軟性、彈性等樣品進(jìn)行快速有效的干磨或濕磨,亦可達(dá)到對(duì)粉體及混濁液混合、均相化的目的,還可以進(jìn)行低溫液氮冷凍研磨,也可以進(jìn)行生物細(xì)胞破碎和DNA/RNA提取。高通量組織研磨機(jī)可研磨的樣品種類包括:植物組織、動(dòng)物組織、細(xì)胞、細(xì)菌、芽孢和酵母等。
組織研磨儀采用垂直振蕩,使研磨管內(nèi)冷凍的樣品與研磨球型號(hào)碰撞,產(chǎn)生的剪切力和撞擊力使組織完全破碎。利用高通量組織研磨儀對(duì)要進(jìn)行DNA提取的植物樣品研磨的好處在于:研磨過程中,不會(huì)對(duì)植物組織造成破壞,可根據(jù)需要選擇干磨、濕磨及冷凍研磨,封閉式的樣品管,避免樣品交叉污染。
組織研磨儀的使用方法如下:1.需將待測(cè)的樣品經(jīng)過簡(jiǎn)單切碎稱重后,放入50ml離心管中。2.然后加入兩粒15mm研磨珠,在高通量組織研磨儀上以1000 r/min研磨3分鐘,即可得到初步的農(nóng)殘檢測(cè)樣品。3.再經(jīng)過提取液分離、鹽類除水和吸附劑除雜之后,就可以得到清液,用于進(jìn)一步的檢測(cè)分析。
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冷凍組織研磨儀是一臺(tái)臺(tái)式多功能儀器。它主要運(yùn)用于小量樣品的干磨、濕磨以及低溫碾磨。將上清棄除(注意別丟棄沉淀),打開管蓋,將RNA沉淀干燥(室溫?fù)]發(fā)或真空干燥)。它能在幾秒鐘內(nèi)就可以達(dá)到混合、均化粉末和懸浮物的目的。此外,還特別適合用于生物細(xì)胞破壁以及DNA/RNA的收集。QM100以其優(yōu)越的性能和高超的靈活度而成為實(shí)驗(yàn)室的不可或缺的儀器。QM100冷凍研磨儀的碾磨罐在水平方向上進(jìn)行圓弧式徑向振動(dòng)。罐內(nèi)的球體由于其慣性作用對(duì)位于光滑的碾磨罐內(nèi)額壁上的。
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DNA的粗提
1) 將高通量組織研磨儀研磨好的樣品取出于65℃水浴45min,中途間隔(輕柔)振蕩三次混勻;
2) 冷卻后加入等體積:易戊醇(24:1),輕柔顛倒混勻使乳化10min;
3) 7000g-8000g離心10min(18-20℃);
4) 吸取上清于另一干凈的離心管中;
5) (根據(jù)需要可用氯放:易戊醇如上法重復(fù)抽提一次,吸取上清);
6) 加入與上清液等體積
7) 離心法沉淀DNA;
8) 在75%乙醇中漂洗DNA數(shù)分鐘以上,用Tip頭吸干乙醇;
9) 用1ml 75%乙醇再漂洗一次;
10) 沉淀于室溫或64℃以下的恒溫箱中干燥片刻至剛出現(xiàn)半透明,不要過度干燥;
11) 用50μlTE溶解沉淀,可用65℃水浴助溶,DNA粗提物可用于粗略PCR等。
利用高通量組織研磨儀對(duì)要進(jìn)行DNA提取的植物樣品研磨的好處在于:研磨過程中,不會(huì)對(duì)植物組織造成破壞,可根據(jù)需要選擇干磨、濕磨及冷凍研磨,封閉式的樣品管,避免樣品交叉污染。