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發(fā)布時(shí)間:2021-07-23 17:29  






ELISA試劑盒的制備方法

包括以下步驟:

1)抗原表位的計(jì)算機(jī)篩選;

2)抗原的制備;

3)采集;

4)間接ELISA方法的建立;

5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗(yàn)證;

6)試劑盒的穩(wěn)定性驗(yàn)證;

7)對(duì)屠宰場(chǎng)進(jìn)行臨床檢測(cè)。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性合格、重復(fù)性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出戊型病毒,適用于大批量發(fā)病樣本的檢測(cè),可用于豬戊肝的快速診斷,并預(yù)防、控制豬戊病毒的流行和阻斷戊病毒由豬向人傳播。



ELISA試劑盒——ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則

1、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。

2、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
3、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
4、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
5、檢測(cè)前,要打開酶標(biāo),使之穩(wěn)定10分鐘以上。
6、底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
7、待檢樣品要澄清,否則會(huì)影響結(jié)果。
8、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
10、對(duì)結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。



Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

將目標(biāo)包被于微孔板中,制成固相載體,向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本,其中的目標(biāo)連接于固相載體上的結(jié)合,然后加入微生物化的目標(biāo),將未結(jié)合的生物素洗凈后,加入HRP標(biāo)記和親和素,再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(O.D.值),計(jì)算樣品濃度。



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