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反向填充(C18,C8, HLB,NH2, CN, Phenyl)

*分析物：無極到中極性

母體：水溶性

·方法：

活化：通常在水溶性有1機溶1劑如甲1醇的作用下活化，然后與水平衡

淋洗：含0-50%極性溶劑的緩沖溶液對雜質(zhì)進行淋洗

(c)洗脫：用極性或非極性溶劑洗脫靶物

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為何 SPE小柱操作強調(diào)流速？

回答： SPE小柱填料充填壓實后，形成柱床，當溶劑流過小柱時，速度過快會引起兩個問題：一是對于粘結(jié)相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過快會使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標物質(zhì)的傳質(zhì)過程，從而降低回收率。當柱流速度為0.5-3.0 mL/min時，通常不會產(chǎn)生溝槽效應(yīng)，且溝槽的形成與柱床高度有關(guān)；當柱流速度為0-3.分析靶物的作用時間較長，控制流速可保證良好的保留效果。

在反相-固相萃取模式中，溶劑體系的極性應(yīng)按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞減，而溶劑體系的洗脫強度應(yīng)逐漸增加。要確保所選的樣本溶劑不會洗脫目標化合物，所選的淋洗劑應(yīng)在不洗脫目標化合物的前提下，很大限度地洗脫干擾物，所選的洗脫劑應(yīng)能恰巧完全洗脫目標化合物。

作用機理：在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標化合物的極性官能團之間會產(chǎn)生極性作用力。普通吸附劑極性力作用在色譜中通常稱為正相色譜吸附劑。極性力比非極性力更強，但比離子力更弱。常用的極性基團有羥基，胺基，巰基等。由于非極性溶劑不能與極性固定相材料形成具有氫鍵的官能團，因此非極性基質(zhì)環(huán)境對吸附劑和目標化合物之間的極性作用力是有利的。結(jié)果表明，在極性作用下，樣品的固相萃取過程中，基質(zhì)主要是非極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標化合物中多含有極性大的官能團。

含碳量

碳量是指填料的含碳量，從側(cè)面反映了C18的修飾程度，在分離效果和目標成分保持時間方面起著重要作用。對于相同類型的填料，高碳柱上的非極性化合物比高碳柱上的碳含量高，碳鏈增大，同時也增加了結(jié)合相的非極性作用面積。C18碳含量由不同的鍵合工藝決定，市場上C18碳含量一般在17-22%之間，也有一些特殊C18碳含量超過22%，但低于14%的C18填料。大部分樣本可以用普通碳含量的C18來解決。而C18的含碳量也并非越多越好，根據(jù)樣品性質(zhì)和純化需要選擇不同含碳量的C18，例如，極性較大的化合物在高含碳量的C18中的保留程度不如低含碳量的C18。

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均衡(Equilibrium)：去除活化溶劑為上樣創(chuàng)造合適的溶劑環(huán)境，使用的溶劑通常與樣品溶液的溶劑一致；對于離子交換柱來說，樣品在堿性化合物平衡液中經(jīng)常需要添加酸，在酸性化合物平衡液中經(jīng)常需要添加堿；保留(Retention)：樣品溶液在吸附劑作用下，吸附劑對某些化合物的作用超過了其對溶劑的作用，這一過程稱為保留。

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浸漬：上樣后，部分干擾物與目標化合物同時被保留，因此需要加入適當?shù)娜芤簛泶笙薅鹊厝コ蓴_物而不影響目標化合物的保留，通常使用上樣溶劑進行浸漬不會影響回收率，但洗脫強度較人的溶劑能大限度地去除干擾物，選擇淋洗液時需要在回收率和凈化效果之間找到平衡；

沖洗(沖洗)：讓有較強沖洗能力的溶劑通過吸附劑，打斷吸附劑與保留的化合物之間的作用力，使這些化合物與吸附劑一起流出；一般情況下，能夠正好沖洗目標化合物的沖洗溶劑是佳選擇，此時沖洗物少，選擇沖洗液時也需要在回收率和清洗效果之間找到平衡。