凍存袋技術(shù)

是將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，減少細(xì)胞代謝，以便長期儲存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一，起到了細(xì)胞保種的作用。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再復(fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。

細(xì)胞凍存的操作步驟

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

凍存袋簡介

屬于醫(yī)院器械領(lǐng)域,涉及一種適合細(xì)胞回輸用的細(xì)胞凍存袋,即生物樣品存儲袋,包括:一存儲袋袋體和與其逐一并排排列的2~6個(gè)第二存儲袋袋體;一和第二存儲袋袋體之間,以及各個(gè)第二存儲袋袋體之間設(shè)置袋體間連接管路;一存儲袋袋體上沿設(shè)置一輸入口并通過該輸入口與連接管的一端連接,生物樣品經(jīng)由連接管并通過輸入口進(jìn)入一存儲袋袋體;一存儲袋袋體上沿設(shè)置一取樣口,各個(gè)第二存儲袋袋體上沿設(shè)置第二取樣口,一取樣口和第二取樣口用于將存儲在袋體內(nèi)的生物樣品取出.本存儲袋能夠方便地用于對生物樣品例如臍帶血造血千細(xì)胞,血漿等處置,存儲,冷凍,復(fù)蘇以及直接給患者回輸生物樣品特別是造血細(xì)胞.