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國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術,目前全球新的等溫擴增檢測技術。以此為基礎的TwistAmp? 核酸擴增產品,能夠在15分鐘內進行常溫下的單分子核酸檢測。該技術對硬件設備的要求很低,特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農業(yè)等領域。
常規(guī)PCR必須經過變性、退火、延伸三個步驟,而PCR儀本質上
恒溫擴增技術
應用領域:廣泛應用于臨床診斷,食品安全檢測,動物疾病檢測等領域
技術特點:快速,特異,無需專門設備
類型:取代PCR的恒溫核酸擴增技術,目前有應用前景的就是RPA技術,此外也有一些其他恒溫擴增技術,主要包括:
1. 滾環(huán)核酸擴增( rolling circle amolification,RCA )
2.環(huán)介導等溫擴增( loop-mediated isothermal amplification,LAMP)
2018年,TwistDx推出了一系列全新的液態(tài)重組酶聚合酶擴增 (RPA)試劑盒,這些試劑盒非常適合需要不使用熱循環(huán)儀就能在15分鐘內完成 DNA/RNA 擴增的實驗室以及想要靈活構建試驗體系的研究人員使用。
TwistAmp??Liquid試劑盒提供經甘油穩(wěn)定化處理的液態(tài)RPA試劑,該形態(tài)對于在實驗室執(zhí)行 PCR 和其他基于酶的反應的任何人來說都非常熟悉。這些試劑各自裝于單獨的試管中,用戶可隨意從中移取任何量的酶混合液來構建自己所選的RPA反應體積,配制用于多次反應的預混液,或者以各種 RPA 組分比例進行實驗以優(yōu)化試驗。
常規(guī)PCR必須經過變性、退火、延伸三個步驟,而PCR儀本質上就是一個控制溫度升降的設備。RPA反應的溫度在37°C - 42°C之間,無需變性,在常溫下即可進行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外,由于不需要溫控設備,RPA可以真正實現便攜式的快速核酸檢測。
據介紹,RPA檢測的靈敏度很高,能夠將痕量的核酸(尤其是DNA)模板擴增到可以檢出的水平,從單個模板分子得到大約1012擴增產物。而且RPA還用不著復雜的樣品處理,適用于無法提取核酸的實地檢測。