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在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過(guò)程中要考慮使用環(huán)境。且來(lái)看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。因?yàn)門(mén)ris堿的堿性較強(qiáng),所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。需要注意的是THAM緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,而且易吸收CO2所以需要密封。THAM主要就是用于生物緩沖劑的,與用于的緩血酸胺有差異,需要加以區(qū)別。
研發(fā):氨基為不含鈉的氨基緩沖堿,在體液中與H2CO3起反應(yīng),使 H2CO3減少,同時(shí)又生成HCO32-,能攝取氫離子而糾正酸血癥,其作用較強(qiáng),且能透過(guò)細(xì)胞膜,常用于急性代謝性及呼吸性酸血癥;作為堿性,用于酸的糾正,且不會(huì)引起二氧化碳滯留增加。由于是用于制藥,對(duì)Tris的整個(gè)生產(chǎn)原料來(lái)源、生產(chǎn)工藝路線、產(chǎn)品純度、雜質(zhì)離子含量都是嚴(yán)格要求的,采購(gòu)這一類產(chǎn)品必須嚴(yán)格謹(jǐn)慎,一定要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè)。
02、緩沖溶液的選擇與計(jì)算
為了保證緩沖溶液有足夠強(qiáng)的緩沖能力,在配制緩沖溶液時(shí),需要做到:
為使共軛酸堿對(duì)的濃度比接近于1,應(yīng)根據(jù)所需要維持的pH范圍選擇合適的緩沖對(duì),使其中的弱酸的PKa等于或接近于所要求的pH。
例如,生物培養(yǎng)液中需用PH=7.0的緩沖溶液,已知H2PO4-的pKa2=7.21,因此,H2PO4—HPO42-是可以選擇的合適的緩沖對(duì)。如若配制PH=9.0的緩沖溶液,則可選擇NH3·H2O-NH4Cl緩沖對(duì)(pKa(NH4 )=9.25)。
常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見(jiàn)的緩沖體系有:
1、弱酸和它的鹽(如HAc---NaAc)
2、弱堿和它的鹽(NH3·H2O---NH4Cl)
3、多元弱酸的酸式鹽及其對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽(如NaH2PO4---Na2HPO4)的水溶液組成。
而生化實(shí)驗(yàn)室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris(三羥)等系統(tǒng),生化實(shí)驗(yàn)或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因?yàn)橛袝r(shí)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。