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親和柱介紹
生物分子之間的親和識(shí)別包括抗體和抗原、酶和底物和受體等之間的親合作用,這些親和作用屬于生物專一性識(shí)別;此外,某些物質(zhì)和生物大分子之間還有一些特異性作用,如染料和某些酶(特別是脫氫酶和激酶等),植物凝集素和糖蛋白,金屬離子和蛋白質(zhì)表面的組氨酸等之間的作用,都可以應(yīng)用于親和分離過(guò)程。
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親和柱性能介紹
親和柱是利用了酶聯(lián)的原理,凈化效果好,同時(shí)有富集作用。
凈化柱就是溶液從柱子過(guò)一下,利用里面的填料吸附一些雜質(zhì)物質(zhì),達(dá)到一定的凈化目的,不能富集。
親和柱的填料全是采用高特異性的抗體,符合真菌毒素檢測(cè)的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),回收率大于95%. 可用于飼料,食品等復(fù)雜樣品的檢測(cè)。
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親和柱親和層析過(guò)程中的注意事項(xiàng)
1、上樣
親和層析純化生物大分子通常采用柱層析的方法。親和層析柱一般很短,通常10cm左右。上樣時(shí)應(yīng)注意選擇適當(dāng)?shù)臈l件,包括上樣流速、緩沖液種類、pH、離子強(qiáng)度、溫度等,以使待分離的物質(zhì)能夠充分結(jié)合在親和吸附劑上。
2、洗脫
親和層析的另一個(gè)重要的步驟就是要選擇合適的條件使待分離物質(zhì)與配體分開(kāi)而被洗脫出來(lái)。親和層析的洗脫方法可以分為兩種:特異性洗脫和非特異性洗脫。
親和柱——親和層析的用途
簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),親和層析利用流動(dòng)相和固定相內(nèi)不同生物分子之間相互作用強(qiáng)度的差異來(lái)分離物質(zhì)。
親和層析常見(jiàn)的用途是純化重組蛋白。親和層析是從粗混合物中純化蛋白質(zhì)或核酸的較佳選擇。如果蛋白質(zhì)的分子量,疏水性,電荷等未知,親和色譜法仍可適用于這種情況。一個(gè)典型例子是嘗試分離具有特定活性的酶時(shí),可以用與所選底物相似或相同的連接配體構(gòu)建親和柱。