低溫生物菌種知多少？

實(shí)驗(yàn)室菌種的傳代保藏過(guò)程

1. 按菌種說(shuō)明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時(shí)，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實(shí)驗(yàn)證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細(xì)菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細(xì)菌則需應(yīng)用其它方法。

低溫生物菌種的影響力

東北地區(qū)一年大約有6個(gè)月的寒冷期。因此，在污水廠的建設(shè)過(guò)程中，往往把氣溫相對(duì)較高的季節(jié)用于污水處理廠的土建。土建完工后，基本上就進(jìn)入了東北地區(qū)的低溫期。目前我國(guó)城市污水處理廠啟動(dòng)與調(diào)試面臨的主要困難是進(jìn)水有機(jī)物濃度低以及低溫造成的微生物增殖緩慢。絕大多數(shù)的污水處理廠的建設(shè)完工后，都需要2~4個(gè)月的時(shí)間才能基本完成污水生化處理工藝的啟動(dòng)，某些污水處理廠生化處理工藝的啟動(dòng)甚至要從頭年的10月份或11月份持續(xù)到來(lái)年氣溫回升的4月份或5月份，因而極大地影響了污水處理廠正常的商業(yè)運(yùn)行。

                                                      低溫生物菌種的保藏法你了解多少？

保藏可按微生物各分支學(xué)科的專業(yè)性質(zhì)分為普通﹑工業(yè)﹑農(nóng)業(yè)﹑醫(yī)學(xué)﹑獸醫(yī)﹑等保藏管理中心。此外﹐也可按微生物類群進(jìn)行分工﹐如沙門氏菌﹑弧菌﹑根瘤菌﹑乳酸菌﹑酵母菌﹑絲狀真菌﹑藻類等保藏中心。

世界上約有 550個(gè)菌種保藏機(jī)構(gòu)。其中有美國(guó)典型菌種保藏中心(簡(jiǎn)稱ATCC﹐馬里蘭)﹕1925年建立﹐是世界上大的﹑保存微生物種類和數(shù)量多的機(jī)構(gòu)﹐保存病毒﹑衣原體﹑細(xì)菌﹑酵母菌﹑真菌﹑藻類﹑原生動(dòng)物等約 29000株﹐都是典型株﹔荷蘭真菌菌種保藏中心(簡(jiǎn)稱CBS﹐得福特):1904年建立﹐保存酵母菌﹑絲狀真菌約 8400種﹑18000株﹐大多是模式株﹔英國(guó)全國(guó)菌種保藏中心(簡(jiǎn)稱NCTC﹐倫敦)﹕保存獸用病原微生物約2740株﹔英聯(lián)邦真菌研究所(簡(jiǎn)稱CMI﹐薩里郡)﹕保存真菌模式株﹑生理生化和有機(jī)合成等菌種2763種﹐8000株﹔日本大阪發(fā)酵研究所(簡(jiǎn)稱IFO﹐大阪):保存普通和工業(yè)微生物菌種約9000株﹔美國(guó)相關(guān)部北方利用研究開發(fā)部(北方地區(qū)研究室﹐簡(jiǎn)稱NRRL﹐伊利諾伊州皮契里亞)﹕收藏農(nóng)業(yè)﹑工業(yè)﹑微生物分類學(xué)所涉及的菌種﹐包括細(xì)菌5000株﹐絲狀真菌1700株﹑酵母菌6000。

                                                            低溫生物菌種的脫水存法

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。