為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來(lái)自實(shí)驗(yàn)室，排風(fēng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾器(www.rfilter.com)過(guò)濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺(tái)，實(shí)驗(yàn)室的面積增加10m2;標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

擴(kuò)增室該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

在巢式PCR測(cè)定中，通常在輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀，本文實(shí)例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實(shí)驗(yàn)室建造過(guò)程中，需要給PCR儀配備專(zhuān)門(mén)的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。

本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。建議采用5~10Pa壓差，在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。

探究PCR實(shí)驗(yàn)室凈化除味系統(tǒng)的選擇與應(yīng)用

雖然各類(lèi)實(shí)驗(yàn)室排放量一般較小，但隨著實(shí)驗(yàn)室數(shù)量的加大，其排放量也是極為可觀的。區(qū)別于標(biāo)準(zhǔn)化的工業(yè)流程，PCR實(shí)驗(yàn)室凈化廢氣中所含污染物的種類(lèi)和濃度往往更加多樣和廣泛，更有可能產(chǎn)生一些具有特殊毒性的化學(xué)物質(zhì)，存在極為嚴(yán)重的潛在危險(xiǎn)。因此，必須對(duì)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的廢氣加以處理，以達(dá)到排放標(biāo)準(zhǔn)。PCR實(shí)驗(yàn)室凈化經(jīng)常使用的凈化除味系統(tǒng)包括:活性炭吸附、光催化燃燒處理技術(shù)、生物分解處理技術(shù)、高能離子凈化系統(tǒng)等。