分光分度計(jì)的概述

分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。常用的波長范圍為：(1)200～380nm的紫外光區(qū)，(2)380～780nm的可見光區(qū)，(3)2.5～25μm（按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進(jìn)行校正檢定。

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分光分度計(jì)的組成部分

儀器組成

分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。

儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

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使用分光光度計(jì)的注意事項(xiàng)

1．該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

2．使用本儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開關(guān)。

3．在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。

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分光光度計(jì)的關(guān)鍵參數(shù)有哪些

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選擇可見和紫外可見的分光光度計(jì)所關(guān)注的*關(guān)鍵的指標(biāo)有三點(diǎn)：一是波長范圍，二是波長準(zhǔn)確度，三是雜散光參數(shù)。波長范圍的選擇是由用戶實(shí)驗(yàn)需要所定，波長范圍越寬的價(jià)格越貴;波長準(zhǔn)確度及雜散光參數(shù)的數(shù)值越低，表示性能越好。

影響顯色反應(yīng)的主要因素

(1)顯色劑用量：通過實(shí)驗(yàn)來確定*適用量；

(2)反應(yīng)液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性；

(3)反應(yīng)溫度：不同的顯色反應(yīng)需要不同的反應(yīng)溫度，一般顯色反應(yīng)可在室溫下完成；

(4)顯色反應(yīng)時間：顯色反應(yīng)的速度有快有慢；

(5)干擾離子的影響：應(yīng)采用適當(dāng)方法消除其影響；