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電泳設(shè)備中電泳的影響因素:
(1)膜的性質(zhì):膜過(guò)分干燥、出現(xiàn)白斑、彎曲、表面緩沖液過(guò)多等都會(huì)影響電泳設(shè)備中的結(jié)果。
(2)緩沖溶液的組成、pH、離子強(qiáng)度和濃度等:緩沖液濃度應(yīng)準(zhǔn)確,濃度太低,區(qū)帶泳動(dòng)速度加快并增加區(qū)帶寬度;濃度過(guò)高,則使區(qū)帶移動(dòng)速度減慢,造成區(qū)帶不易分離。緩沖液使用次數(shù)太多、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也可使?jié)舛雀淖?,若膜與緩沖液接觸不良,則影響電泳結(jié)果。
(3)電流和電壓:電流太大會(huì)影響電泳,高壓電泳時(shí),必須裝備有效的冷卻裝置。
另外,如果樣品量太多、加樣不爭(zhēng)氣、起始位置錯(cuò)誤也可影響電泳設(shè)備的結(jié)果。
電泳設(shè)備裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽 由于陽(yáng)極電泳涂裝槽液偏堿性,陰極電泳涂裝槽液偏酸性,因而對(duì)設(shè)備的要求不同,陰極電泳要求槽、電極、泵、管路等要耐酸;另外,整流設(shè)備的要求也不同,陰極電泳設(shè)備涂裝電壓較高,一般為100-200V,而陽(yáng)極一般為50-100V;除此這外烘烤設(shè)備也不同,由于陽(yáng)極電泳烘烤的放氣量較大,就要求烘烤設(shè)備有較大的換氣量。
電泳設(shè)備槽可以分為水平式和垂直式兩類(lèi):
1垂直板式電泳是較為常見(jiàn)的一種,常用于電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開(kāi),在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm~14 cm,厚度為1mm~2 mm,近年來(lái)新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳設(shè)備的工作時(shí)間。
2水平式電泳設(shè)備,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳設(shè)備緩沖液,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。