1.抗活性的Arl1，小鼠單克l隆抗l體（貨號(hào)26924）：一小瓶–溶于pH 7.4的PBS中的22 μL（1mg / ml），含有50％甘油和0.05％疊氮l化鈉。該抗l體特異性識(shí)別所有脊椎動(dòng)物的Arl1-GTP。

2.蛋白A / G瓊脂糖（目錄號(hào)30301）：一小瓶– 400 μL 50％漿液。

3. 5X測(cè)定/裂解緩沖液（目錄號(hào)30302）：一瓶– 30 mL的250 mM Tris-HCl，pH 8，750mM NaCl，50 mM MgCl2，5 mM EDTA，5％Triton X-100。

4.抗Arl1，小鼠單克l隆抗l體（目錄號(hào)26056）：一小瓶– 100 μL（1 mg / ml）

pH 7.4的PBS中含有50％的甘油。

5. 100 XGTPγS（貨號(hào)30303）：1瓶– 100 μl，10 mM，使用5 μLGTPγSGTP標(biāo)記的0.5 mL細(xì)胞裂解物。

6. 100 X GDP（產(chǎn)品目錄號(hào)30304）：一個(gè)樣品瓶– 100 μl，100 mM，使用5 μL GDP

GDP標(biāo)記的0.5 mL細(xì)胞裂解物。

1.刺激的和非刺激的細(xì)胞裂解液

2.蛋白酶抑制l劑

3. 4°C管搖桿或搖床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化鎂

6. 2倍還原SDS-PAGE樣品緩沖液

7.電泳和免l疫印跡系統(tǒng)

8.免l疫印跡洗滌緩沖液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％Tween-20）

9.免l疫印跡封閉緩沖液（TBST包含5％脫脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纖維素膜

11.二抗

12. ECL檢測(cè)試劑

?1X測(cè)定/裂解緩沖液：短暫混合5X儲(chǔ)備液，并在去離子水中稀釋至1X。 在使用前，添加蛋白酶抑制l劑，例如1 mM PMSF，10 μg / mL亮肽素和10 μg / mL抑肽酶。

產(chǎn)品描述

一系列結(jié)構(gòu)多樣的配體，從光子到大肽，激l活GPCRs來(lái)激發(fā)它們的生理功能。配體結(jié)合的GPCRs，反過(guò)來(lái)，起到鳥(niǎo)呤核苷酸交換的作用Gβγ存在下Gα亞基上的GDP與GTP交換的催化因子，導(dǎo)致Gα亞單位與Gβγ二聚體分離形成兩個(gè)功能單元（Gα和Gβγ）。Gα和Gβγ亞單位都向各種細(xì)胞信號(hào)通路發(fā)出信號(hào)。根據(jù)順序與功能同源，G蛋白分為四個(gè)家族：Gs，Gi、Gq和G12。增加這些G蛋白的效應(yīng)器和相互作用蛋白的數(shù)量已經(jīng)被鑒定，生理上G蛋白參與的過(guò)程正在增殖。

分析原理

基于構(gòu)型特異性抗Gα13-GTP的NewEast生物科學(xué)Gα13活化檢測(cè)試劑盒從細(xì)胞提取物或體外檢測(cè)活性Gα13-GTP水平的單克l隆抗l體GTPγS負(fù)載Gα13活化試驗(yàn)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，抗活性Gα13小鼠單克l隆抗l體用含有Gα13-GTP的細(xì)胞裂解液培養(yǎng)。結(jié)合的活性Gα13將被蛋白質(zhì)A/G瓊脂糖。用兔抗α13多克l隆抗l體免l疫印跡法檢測(cè)沉淀的活性Gα13。