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1、常用的定量分析方法:標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法、直接定量(外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法)
2、層析柱主要有:弗羅里硅土柱、氧化鋁柱、硅膠柱、活性碳柱、其他填料層析柱子
3、液相色譜的特點(diǎn)是:、高速、高靈敏度、高度自動(dòng)化
4、氣相色譜儀常用的檢測(cè)器有:火焰離子化檢測(cè)器(FID)、火焰光度檢測(cè)器(FPD)
電子捕獲檢測(cè)器(ECD)、氮磷檢測(cè)器(NPD)、原子發(fā)射檢測(cè)器
5、檢測(cè)器的評(píng)價(jià)指標(biāo):噪聲、漂移、靈敏度、線(xiàn)性范圍與動(dòng)態(tài)范圍
6、氣相色譜柱有:填充柱、毛細(xì)管柱(開(kāi)管型和填充型)
層析簡(jiǎn)介
層析(chromatography)是“色層分析”的簡(jiǎn)稱(chēng)。利用各組分物理性質(zhì)的不同,將多組分混合物進(jìn)行分離及測(cè)定的方法。有吸附層析、分配層析兩種。一般用于有機(jī)化合物、金屬離子、氨基酸等的分析。層析利用物質(zhì)在固定相與流動(dòng)相之間不同的分配比例,達(dá)到分離目的的技術(shù)。層析對(duì)生物大分子如蛋白質(zhì)和核酸等復(fù)雜的有機(jī)物的混合物的分離分析有極高的分辨力。
層析填料的分類(lèi)
在把微細(xì)分散的固體或是附著于固體表面的液體作為固定相,把液體(與上述液體不相混合的)或氣體作為移動(dòng)相的系統(tǒng)中,使試料混合物中的各成分邊保持向兩相分布的平衡狀態(tài)邊移動(dòng),利用各成分對(duì)固定相親和力不同所引起的移動(dòng)速度差,將它們彼此分離開(kāi)的定性與定量分析方法,稱(chēng)為層析,亦稱(chēng)色譜法。根據(jù)移動(dòng)相種類(lèi)的不同,分為液體層析、氣體層析二種。
選擇層析方法
用分離范圍寬廣的凝膠過(guò)濾介質(zhì)如Superose, Sephacryl HR依據(jù)分子量將樣品分成不同組份
用含專(zhuān)一配體或的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)蛋白,一步即可得到高純度樣品;亦可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標(biāo)蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì)
體積大的樣品,往往使用離子交換層析來(lái)濃縮和粗純化;高鹽洗脫的樣品再用疏水層析純化
疏水層析用高鹽吸附,低鹽洗脫的原理,洗脫的樣品又可直接上離子交換介質(zhì);兩種方法常被交替使用