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食品公司核酸提取純化多重優(yōu)惠“本信息長期有效”

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發(fā)布時間:2020-07-23 09:15  






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據(jù)介紹,該發(fā)明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測試劑及其制備方法與用途,設(shè)計合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽性對照,并利用該引物及探針建立了一種快速簡便、特異性強、靈敏度高的熒光 PCR 檢測體系,可在 3~4 小時內(nèi)從被檢樣本中快速、準確、特異、安全、簡便地檢出 ASFV CP530R 基因,可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測。廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠熒光定量PCR相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對水平不用使用標準曲線就可以確定。

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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。不同的核酸序列,哪怕僅有一個堿基的差異,也會體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。從 20 世紀 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開始在我國快速蔓延開來,對我國養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。因此,本方法為快速診斷非洲病毒,提供了有力的技術(shù)手段。



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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營者采購生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗其動物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗合格證明以及非洲病毒檢測結(jié)果(報告),確保購進的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;采購的進口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗檢疫合格證明。廣州勱博--生豬屠宰場病毒核酸提取系統(tǒng)經(jīng)銷根據(jù)動物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫(yī)實施屠宰檢疫。不得采購沒有非洲病毒檢測結(jié)果(報告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。

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所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。



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熒光定量PCR技術(shù)產(chǎn)生并成熟于上世紀90年代,由于該技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,能夠?qū)CR反應(yīng)的全過程進行實時監(jiān)控,并且自動化程度高,所以該技術(shù)從產(chǎn)生到現(xiàn)在短短的十幾年時間,在科研及檢驗領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的一項重要技術(shù)。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號隨著PCR反應(yīng)的積累來實時監(jiān)控PCR反應(yīng)的進程,并通過分析軟件對PCR的反應(yīng)進行檢測分析的技術(shù)。其原理:隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加。系統(tǒng)組成:定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。

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進行熒光定量PCR體系的配制時i好在冰上進行,操作環(huán)境不用非得在超凈臺中進行,環(huán)境安靜整潔都可以。因為每一個梯度要做三個重復(fù),因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。實驗中我使用過熒光定量八聯(lián)管和96孔板,個人推薦96孔板。廣州勱博--生豬屠宰場PCR熒光定量PCR最早稱TaqManPCR,后來也叫Real-TimePCR,是美國PE(PerkinElmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。因為八聯(lián)管你需要蓋上蓋子,而且蓋子比較的難按下去,稍不慎就把八聯(lián)管弄斷或者液體撒出來。有的時候一下忘記了是從哪邊開始的。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。上機器前i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來同時也消掉氣泡。


廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗證、藥i效分析等。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

一般而言,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋, 無法判斷產(chǎn)物量的變化。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。而在平臺期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系,根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號指數(shù)擴增階段, PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系,我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便,在實時熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個非常重要的概念:熒光閾值和 CT值.

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什么是熒光定量PCR?常規(guī)PCR中,擴增產(chǎn)物(擴增子)是通過終點法來分析檢測,即PCR反應(yīng)結(jié)束后,DNA通過瓊脂糖凝膠電泳,然后進行成像分析。而熒光定量PCR可以在反應(yīng)進行過程中進行累積擴增產(chǎn)物的分析和檢測,即“實時”。在反應(yīng)體系中加入熒光分子,通過熒光信號的按比例增加來反應(yīng)DNA量的增加,使PCR產(chǎn)物的實時檢測成為可能。如采用常規(guī)的終點檢測法(利用EB染色來判斷擴增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點熒光信號強度。滿足實驗?zāi)康牡臒晒饣瘜W(xué)物質(zhì)包括DNA結(jié)合染料和熒光標記的序列特異引物或探針;專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測模塊,用于監(jiān)測擴增時的熒光,檢測到的熒光信號反映了每個循環(huán)擴增產(chǎn)物的量。


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