Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測試劑。WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯j(luò)i)-3-(4-硝ji苯j(luò)i)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，是一種類似于MTT的化合物，它在電子載體1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情況下，被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產(chǎn)物（formazan）。共培養(yǎng)-定時間后進(jìn)行破骨細(xì)胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacidphosphatase,TRAP染色鑒定和骨吸收功能檢測，并進(jìn)一步采用RT-PCR對破骨細(xì)胞標(biāo)志酶基因基質(zhì)金屬蛋白酶。細(xì)胞增殖越多越快，顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺，對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺與活xi胞的數(shù)量成正比，因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。

自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器，終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu),內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、

病毒和細(xì)菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被于檢測自噬體形成的特異性標(biāo)記染色劑,其檢測激發(fā)濾光片波長355nm ,阻斷濾光片波長512nm。分離和富集精原gan細(xì)胞成為精原gan細(xì)胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件。Leagene MDC染色液適用于培養(yǎng)細(xì)胞的自噬染色，可與EB合用雙染。

血管生成技術(shù)

一、服務(wù)介紹

zhong瘤血管生成是一個極其復(fù)雜的過程，一般包括包括血管內(nèi)皮基質(zhì)降解、內(nèi)皮細(xì)胞移行、內(nèi)皮細(xì)胞增殖、內(nèi)皮細(xì)胞管道化分支形成血管環(huán)和形成新的基底膜等步驟。7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40日中不會凝固。由于zhong瘤組織這種新生血管結(jié)構(gòu)及功能異常，且血管基質(zhì)不完善，這種微血管容易發(fā)生滲漏，因此腫liu細(xì)胞不需經(jīng)過復(fù)雜的侵襲過程而直接穿透到血管內(nèi)進(jìn)入血流并在遠(yuǎn)隔部位形成轉(zhuǎn)移。

血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的mao細(xì)血管和毛xi血管后微靜脈新的mao細(xì)血管性血管的生長。無論原發(fā)性zhong瘤還是繼發(fā)性zhong瘤，一旦生長直徑超過1~2 mm，都會有血管生成。3D細(xì)胞培養(yǎng)3D多細(xì)胞腫liu球是在體外應(yīng)用組織培養(yǎng)方法使腫liu細(xì)胞以多細(xì)胞集聚體的形式生長成為具有三維結(jié)構(gòu)的球體。這是由于zhongt瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長因子，誘導(dǎo)血管生成。

大鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)

方法：分離大鼠主動脈,直接貼壁于培養(yǎng)皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),免yi組化Ⅷ因子相關(guān)抗原染色鑒定細(xì)胞.結(jié)果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細(xì)胞長出,7天即融合成片.消化傳代后細(xì)胞呈短梭形或三角形,單層生長,鋪路石狀,Ⅷ因子表達(dá)陽性,呈指數(shù)增殖.凍存后復(fù)蘇細(xì)胞活性均超過90%.結(jié) 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法,凍存細(xì)胞存活率高,為體外研究提供了穩(wěn)定的模型.