ELISA試劑盒的組成結(jié)構(gòu)

1、 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2、 血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測(cè)。

ELISA試劑盒的操作方法——雙夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。

3.　加酶標(biāo)：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“ ”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。

ELISA試劑盒-ELISA檢測(cè)原理介紹

酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或結(jié)合到聚乙烯等固相載體上，利用抗原結(jié)合專一性進(jìn)行反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用比較多的一種酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥品和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測(cè)組織提取液和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。

ELISA試劑盒主要實(shí)驗(yàn)原理

·包被：抗原或者能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質(zhì)和聚乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反應(yīng)等活性；

·標(biāo)記：抗原或者可通過共價(jià)鍵與酶連接成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其活性和酶的催化特點(diǎn)；

·顯色：酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或者結(jié)合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者的相對(duì)含量。