熒光分光光度計種類

熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、藥學和藥理學、有機和無機化學等領域。熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計三個階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辨測定的熒光分光光度計等。

熒光分光光度計的構成

1. 光源：為氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等，故較常用。

2．激發(fā)單色器：置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。

3．發(fā)射單色器：置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。

4． 樣品室：通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。

5． 檢測器：一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D(zhuǎn)為電信號。

熒光光譜特點

靈敏度更高  g/ml，應用不如UV廣泛。應用：①直接熒光光度法②作為HPLC的檢測器（用的多）根據(jù)物質(zhì)分子吸收光譜和熒光光譜能級躍遷機理，具有吸收光子能力的物質(zhì)在特定波長光（如紫外光）照射下可在瞬間發(fā)射出比激發(fā)光波長長的光，即熒光。 分子受特定光照射后處于激發(fā)態(tài)的 分子返回基態(tài)時發(fā)出熒光, 其熒光強度與 呈線性關系, 從而可測出氣體濃度。當檢測儀器系統(tǒng)確定后，熒光總光強I與 濃度的之間的關系可表示為：I=KC在穩(wěn)定的條件下，這些參數(shù)也隨之確定，k可視為常數(shù)。因此，式中I=kC表示的紫外熒光光強I與樣氣的濃度C成線性關系。這是紫外熒光法進行定量檢測的重要依據(jù)。

淺析熒光光譜

無論分子初處于哪一個激發(fā)單重態(tài)，通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及振動弛豫，均可返回到激發(fā)單重態(tài)的低振動能級，然后再以輻射形式發(fā)射光而返回至基態(tài)的任一振動能級上,這時發(fā)射的光稱為熒光。由于振動弛豫和內(nèi)轉(zhuǎn)換損失了部分能童，故熒光的波長總比激發(fā)光波長要長。發(fā)射熒光的過程為 秒。由于電子返回基態(tài)時可以停留在基態(tài)的任一振動能級上，因此得到的熒光譜線有時呈現(xiàn)幾個非常靠近的峰。通過進一步振動弛豫，這些電子都很快地回到基態(tài)的低振動能級。