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發(fā)布時(shí)間:2021-07-28 08:32  






等溫核酸試劑盒

FAQ

1 RPA能實(shí)現(xiàn)多重化嗎?

可以。RPA技術(shù)支持在同一個(gè)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)。不過(guò),多重化的引物組合需要精心設(shè)計(jì),以便每個(gè)引物都能同樣有效的工作。需要注意的是,RPA反應(yīng)的引物總量(nmol)不要超標(biāo)太多。如果在一個(gè)反應(yīng)中使用兩個(gè)以上的擴(kuò)增引物,就應(yīng)該控制不同引物的量。另外,我們應(yīng)當(dāng)事先考慮好檢測(cè)多個(gè)擴(kuò)增事件的探針、設(shè)備以及熒光團(tuán)的兼容性。




核酸試劑盒

英國(guó)TwistDx 公司(前身為ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英國(guó)劍橋Babraham研究院建立的生物技術(shù)公司。該公司通過(guò)突破等溫DNA擴(kuò)增,開(kāi)發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(RPA),被譽(yù)為DNA診斷領(lǐng)域的革命性創(chuàng)新。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,反應(yīng)溫度在37°C左右。




RPA反應(yīng)的適宜溫度在37℃~42℃之間,無(wú)需變性,常溫下即可反應(yīng),大大加快了PCR的速度。并且由于不需要溫控設(shè)備,RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測(cè)。RPA檢測(cè)的靈敏度很高,能夠?qū)⒑哿康暮怂?/span>(尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可檢出水平,從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。無(wú)需復(fù)雜樣品處理,即可實(shí)地檢測(cè);既可擴(kuò)增DNA也可擴(kuò)增RNA,省去額外的cDNA合成步驟;檢測(cè)方式多樣:終點(diǎn)檢測(cè)、對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控或通過(guò)側(cè)流層析試紙條(LFD)讀取結(jié)果。

試劑盒包括兩類:①.TwistAmp凍干研發(fā)試劑盒(包括TwistAmp Basic試劑盒、TwistAmp exo 試劑盒和TwistAmp nfo 試劑盒共三種);②. TwistAmp液態(tài)研發(fā)試劑盒(包括TwistAmp Liquid Basic 試劑盒和TwistAmp Liquid exo 試劑盒共兩種)

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目前,核酸檢測(cè)方法主要包括PCR法、恒溫?cái)U(kuò)增法、測(cè)序法、CRISPR檢測(cè)法等。其中,第二代PCR技術(shù)是病毒檢測(cè)方法的主流方法,也是目前認(rèn)可的SARS-CoV-2測(cè)定方法。第二代PCR技術(shù),又稱熒光PCR法,是指在反應(yīng)體系中加入了熒光物質(zhì),通過(guò)專門儀器實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光檢測(cè),并對(duì)模板進(jìn)行定量計(jì)算。為了增加靈敏度和特異性,熒光PCR法出現(xiàn)了不少改進(jìn)版本,包括Taqman探針?lè)?、雙重或多重?zé)晒釶CR等。




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